清络饮治疗类风湿性关节炎的实验研究

2016-06-03 02:29魏托李艳
河南医学研究 2016年4期
关键词:类风湿关节炎

魏托 李艳

(1.浦口区中医院 江苏 南京 211800; 2.皖南医学院弋矶山医院 中医科 安徽 芜湖 241000)



清络饮治疗类风湿性关节炎的实验研究

魏托1李艳2

(1.浦口区中医院江苏 南京211800; 2.皖南医学院弋矶山医院 中医科安徽 芜湖241000)

【摘要】目的观察清络饮对完全弗氏佐剂(CFA)类风湿性关节炎(RA)大鼠模型的一般状态及炎症指标的影响。方法选择普通雌性大鼠30只,随机分为空白对照组、模型对照组、治疗组,各10只。采用RA造模成功1周后,灌注清络饮汤药,1次/d,共21 d。①记录每组大鼠脚掌的疼痛、肿胀指数;②21天后断尾采血,用ELISA法做IL-1定量测定。最后用方差分析和SNK-q检验分析组间差异。结果和模型对照组比较,治疗组关节肿胀度下降速度明显,痛阈值明显提高(P<0.05);治疗组CFA大鼠血清IL-1水平低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论清络饮可以改善RA的部分临床症状。

【关键词】类风湿关节炎;完全弗氏佐剂;清络饮

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、炎性、系统性、多发性的自身免疫性疾病,关节逐渐受到破坏,严重影响患者的工作和生活[1]。临床上尚无特效药物,所用药物多为非甾体类抗炎药、激素、慢作用药物等。由于西药在风湿病的治疗方面存在副作用较大、副作用发生率较高的缺点,因此广大医务工作者把目光投向了中医药。清络饮是在长期临床实践基础上总结出来的,由苦参、黄柏、青风藤等组成,组方中主要是寒性药物,起到清热除湿、通络开痹的作用,是治疗RA湿热阻络的代表方剂[2]。本实验通过观察清络饮对CFA大鼠脚掌疼痛、肿胀指数及血清IL-1水平的影响,研究清络饮对RA的治疗效果,为临床提供新的思路与方药。

1资料与方法

1.1主要试剂和仪器完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)试剂盒购自上海晶天生物有限公司,规格:25 mg;LI-1试剂盒(批号:20091010)购自合肥志宏生物有限公司,规格:98T;YLS-6A智能热板仪购自山东省医学科学院设备站。

1.2实验动物及分组选取30只普通雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型对照组、治疗组,各10只,对每组大鼠进行编号。

1.3造模方法除空白对照组外,各组每只大鼠均于右后足趾皮内注射CFA 0.1 ml进行致炎,并于致炎前1 h,致炎后3、12、18 h各测大鼠左右后足趾容积1次,以后每天测1次,以观察其足趾关节肿胀程度。在第7天左右产生变态反应炎症,即模型形成。

1.4给药空白对照组与模型对照组造模后不给任何受试因素,治疗组第7天开始灌胃,成分为清络饮溶液,1次/d,每次1 ml/100 g,连续21 d。

1.5指标的观察足趾容积的测量:用玻璃容器法测量大鼠足趾容积,取一20 ml量筒,内径2 cm,用记号笔在每个大鼠后足踝关节周围做一标记,将其待测足趾慢慢浸入量筒液体内,提出足趾可见量筒内液面下降,其下降容积即为足趾容积,用1 ml移液管慢慢将液体注入量筒内,移液管的读数即大鼠的足趾容积。计算公式:足趾肿胀度(ml)=实际测量值(用药后测定值)-初次测量值(第1次用药前测定值)。

痛阈值的检查:将30只大鼠(动物经过预热,热板耐受时间为5~30 s)置于热板上,温度(55±5)℃,分别记录8、15、21 d用药前、后的大鼠舔足时间,连续测2次,取平均值为大鼠耐受时间,即痛阈值。

血清学检测:灌胃第21天对30只大鼠断尾取血各4 ml,ELISA法检测血清IL-1水平,操作按试剂盒说明书进行。

2结果

2.1关节肿胀度与空白对照组比较,模型组、治疗组大鼠经CFA致敏后第8天右后足已明显肿胀(P<0.05)。灌胃治疗第8天起,模型组和治疗组足趾肿胀度减轻,且治疗组下降速度明显快于模型组(P<0.05)。见表1。

表1 3组大鼠右足趾肿胀程度变化情况比较±s,ml)

注:与空白对照组比较,aP<0.05;与模型组比较,bP<0.05。

2.2关节痛阈值与空白对照组比较,模型组、治疗组大鼠经CFA致敏后痛阈值明显降低(P<0.05)。治疗组给药第8天起痛阈值逐渐升高,第15天后较模型组的痛阈值已有明显提高(P<0.05)。见表2。

表2 3组大鼠热板实验痛阈值变化情况比较±s,s)

注:与空白对照组比较,cP<0.05;与模型组比较,dP<0.05。

2.3ELISA检测结果灌胃第21天后空白对照组、模型组和治疗组血清IL-1水平分别为(24.21±2.15)、(54.37±3.24)、(31.24±2.82)pg/ml。治疗组及模型组大鼠血清IL-1水平均高于空白对照组(P<0.05)。治疗组血清IL-1水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

RA是一种全身性自身免疫病,其特征为慢性侵蚀性关节炎。一般情况下,RA患者是由于滑膜组织炎症造成关节软骨和骨质破坏,最终导致关节畸形。如果不能得到正规治疗,约75%的患者会在3 a内出现残废[2]。中医药在治疗RA方面有其独特的优势,但长期以来缺乏相应的药效学研究,限制了其在临床中的广泛应用。开展药效学研究选择合适的动物模型很关键。大鼠佐剂性关节炎是一种以细胞免疫功能紊乱为主的免疫炎症模型,其与人RA非常相似,因此CFA制备的佐剂性关节炎大鼠是研究RA的理想动物模型[3]。另外,活动期RA患者的关节滑液中促炎症性细胞因子,如白细胞介素IL-1的水平显著升高[4]。因此,本实验通过观察CFA大鼠足趾损害后IL-1等指标的变化,探讨以清热祛湿为主的清络饮治疗RA的作用,为该药的临床应用提供实验依据。

清络饮是中医清法的代表,该方中含有苦参、黄柏、青风藤等药物。《本草纲目》指出,苦参、黄柏之苦寒皆能补肾,盖取其苦燥湿,寒除热也;热生风,湿生虫,故又能治风杀虫。该书还认为清风藤为散风寒湿痹之药也,能舒筋活血,正骨利髓,久服常服,大建奇功。现代药理学研究表明,氧化苦参碱肌注能明显对抗巴豆油、角叉菜胶(大鼠)和冰醋酸(小鼠)诱发的急性炎症;黄柏及其主要成分小檗碱等则已被发现具有免疫抑制等作用;青风藤的提纯物青藤碱、青风藤碱等均具有抗炎、镇痛、解痉等作用[5]。该方以清热除湿、通络开痹为目的,发挥抑制免疫反应、抗炎、镇痛等作用。本课题通过对CFA型大鼠的实验学研究也表明,清络饮对大鼠的足趾肿胀度、疼痛耐受指数都有明显改善。通过ELISA法检测大鼠血IL-1水平可以发现,清络饮对CFA型大鼠血IL-1水平有明显的抑制作用,从而阻断炎症介质的产生,发挥治疗RA的作用。

然而,治疗RA的中药药理研究均从现代病理药理机制研究中所涉及的病理因素、病理效应着手,观察药物的干预作用。至于如何从中医学角度出发,将宏观与微观相结合,探求适合RA的中药药理研究方法,手法尚单一。中药成分复杂,迄今多数中药的活性成分及有效成分尚难以确认,使其科学性难以得到认可;体外实验手段不足,虽已有中药血清药理方法,但尚未得到广泛认可;对中医的“证”的病理模型难以定性和建立;中药方剂的药效往往是多种成分共同作用的结果,一种有效成分的药动学并不能完全代表整个方剂的药动学。因此,由多种中药组成的清络饮有效成分及作用还有待进一步研究。

参考文献

[1]鄂绪,周郁秋,张慧等.认知行为疗法对类风湿关节炎患者负性情绪治疗效果的Meta分析[J].中国实用护理杂志,2015,31(9):689-694.

[2]van der Heijde D,Tanaka Y,Fleischmann R,et al.Tofacitinib (CP-690,550) in patients with rheumatoid arthritis receiving methotrexate: twelve-month data from a twenty-four-month phase III randomized radiographic study[J].Arthr Rheumat,2013,65(3):559-570.

[3]缪成贵,周国梁,秦梅颂,等.禹州漏芦总黄酮对类风湿关节炎大鼠治疗机制研究[J].浙江大学学报(医学版),2015,44(1):43-48.

[4]张清,岳涛,周凌,等.人重组白细胞介素-1受体拮抗剂在类风湿关节炎治疗中的继发性失效[J].中华风湿病学杂志,2012,16(5):335-338.

[5]赵晋辉,李晓梅.类风湿专方治疗类风湿关节炎临床观察[J].山西中医,2014,30(2):37-38.

Experimental study on Qingluoyin in the treatment of rheumatoid arthritis

Wei Tuo1, Li Yan2

(1.PukouDistrictChineseMedicineHospital,Nanjing210000,China;2.YijishanHospital,WannanMedicalCollege,Wuhu241000,China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of Qingluoyin on the general status and inflammation index on complete Freund’s adjuvant (CFA) rat model of rheumatoid arthritis (RA). Methods30 female rats were selected and randomly separated into normal control group, model group, treatment group. After a week, the rats in treatment group were fed with the Qingluoyin principle. The pain and swell indexs of the rat feet were recorded and the levels of LI-1 were measured. At last, the data were analyzed by analysis of variance and SNK-q test. ResultsCompared with model group, swelling degree was lower and the pain threshold was higher (P<0.05). The level of LI-1 of the rats in treatment group was lower than the model group, and the different was statistically significant (P<0.05). ConclusionQingluoyin is an effective prescription in relieving symptoms caused by rheumatism.

【Key words】rheumatoid arthritis;complete Freund’s adjuvant;Qinglongyin

(收稿日期:2015-10-06)

【中图分类号】R 965.2

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.04.007

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