人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

崔璐璐，毕嘉成，李俊鑫，刘绿艳，叶秀峰，郑明星，万晓春，于广



人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

崔璐璐，毕嘉成，李俊鑫，刘绿艳，叶秀峰，郑明星，万晓春，于广

【摘要】

目的通过制备小鼠抗人 IgE 单克隆抗体，为过敏性疾病的研究及诊断打下基础。

方法以 CRL8033 细胞的 cDNA 为模板扩增人 IgE Fcε3-4 段基因序列并将其连接到 pET-32a（+） 载体中，转化BL21（DE3）大肠杆菌并进行表达。然后将表达所得包涵体进行变复性，把复性所得蛋白进行亲和纯化，通过 SDS-PAGE验证纯化效果。最后将纯化的蛋白作为抗原免疫 BALB/c小鼠，经三次免疫后取小鼠脾脏细胞与 SP2/0 细胞融合。用 ELISA 法筛选出能结合人 IgE 蛋白的阳性克隆，并应用 ELISA、Western blot 等手段对杂交瘤所分泌单克隆抗体的特异性进行鉴定。

结果成功构建 pET-32a（+）-IgE Fcε3-4 载体并纯化 IgE Fcε3-4 蛋白。用该蛋白作为免疫原免疫小鼠，成功制备了杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体能够特异性结合人 IgE蛋白，可用于 ELISA、Western blot 等手段对人 IgE 的检测。

结论成功获得了可用于特异性检测人 IgE 蛋白的单克隆抗体，为人 IgE 的检测及哮喘等过敏性疾病的研究、诊断及治疗奠定了基础。

【关键词】免疫球蛋白 E；抗体，单克隆；过敏性疾病

www.cmbp.net.cn中国医药生物技术, 2016, 11(3):242-246

作者单位：121001 辽宁，锦州医科大学基础医学院（崔璐璐、于广）；518055 深圳，中国科学院深圳先进技术研究院（毕嘉成、李俊鑫、刘绿艳、万晓春）；518035 深圳，广东省深圳市第二人民医院呼吸科（叶秀峰、郑明星）

IgE 在哮喘等过敏性疾病中发挥重要作用［1］，它由 B 细胞分泌［2］，通过与嗜酸性粒细胞［3］和肥大细胞［4］表面的 Fc 受体结合，导致其脱颗粒释放炎性介质，从而引起过敏症状。……