绿色荧光蛋白放射免疫分析试剂盒的研制

姜晓静，孙秀柱，朱化彬，杜卫华，郝海生，赵学明，王栋，刘岩



绿色荧光蛋白放射免疫分析试剂盒的研制

姜晓静*，孙秀柱*，朱化彬，杜卫华，郝海生，赵学明，王栋，刘岩

作者单位：100193 北京，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所（姜晓静、朱化彬、杜卫华、郝海生、赵学明、王栋、刘岩）；712100 陕西杨凌，西北农林科技大学动物科技学院（姜晓静、孙秀柱）

*同为第一作者

绿色荧光蛋白（GFP）于 1962 年在一种学名为Aequorea Victoria 的水母中发现，包含 238 个氨基酸残基［1-2］。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会吸收蓝光的部分能量，发出绿色荧光。GFP 常用于标记某些特定的 RNA、内源性代谢产物以及靶蛋白［3］，可通过荧光显微镜实时观察，也可通过荧光激活细胞，分选分离细胞［4］。这一活体生物标记［5］特性，使得 GFP 成为实时观察细胞、组织、器官不可或缺的工具［6］，在转基因动物生产中也得到了广泛的应用［7-12］。

目前，对 GFP 的检测方法分为定性检测及定量检测。定性检测包括荧光观察［13］、免疫组化［14-16］、Western blot等［17-19］，定量检测可以通过 ELISA 方法。但通过 ELISA 方法定量检测 GFP 含量［20-22］，显色时间不容易控制，检测灵敏度受到免疫反应显色精确度的限制。对于少量 GFP 残留的检出率低，不利于精确检测［23］。

本实验应用竞争机制原理，研制了一种高灵敏度的GFP 放射免疫检测试剂盒，最低检测限位 1 pg/ml。本试剂盒的一抗使用浓度低，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，实验效率高，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法，对实现大批量样品的 GFP 残留监控具有重要的意义。……