Ⅱ型登革病毒非结构蛋白1多克隆抗体制备和免疫特征分析

杨小猛　赵丹　杜丽伟　陈相　江丽芳



Ⅱ型登革病毒非结构蛋白1多克隆抗体制备和免疫特征分析

杨小猛1赵丹2★杜丽伟1陈相1江丽芳3

［摘要］目的制备抗Ⅱ型登革病毒（dengue virus type 2，DENV2）非结构蛋白1（nonstructural protein 1，NS1）多克隆抗体，分析该抗体的免疫特性。方法采用NS1蛋白免疫BALB/c小鼠，取血分离血清，纯化获得抗NS1抗体。酶联免疫吸附试验法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）分析抗NS1抗体与NS1蛋白和DENV2结合特性。免疫荧光法测定抗NS1抗体与人微血管内皮细胞株1 （human microvascular endothelial cell 1，HMEC⁃1）的交叉反应性。ELISA法分析抗NS1抗体、HMEC⁃1和新鲜同系小鼠血清共培养体系中活化补体的含量。结果抗NS1抗体能与NS1和DENV2特异性结合，抗体最高滴度分别为1∶1 280和1∶640。抗NS1抗体能与HMEC⁃1细胞交叉结合，抗NS1抗体、HMEC⁃1和新鲜同系小鼠血清共培养上清液中C3a、C4a、C5a和sC5b⁃9含量均显著高于HMEC⁃1和新鲜同系小鼠血清共培养（均P<0.05），以及PBS、HMEC⁃1和新鲜同系小鼠血清共培养（均P<0.05）。结论抗DENV2 NS1抗体能交叉结合于血管内皮细胞并激活补体系统，可能在登革出血热的免疫病理机制中起重要作用。

［关键词］Ⅱ型登革病毒；非结构蛋白1；抗非结构蛋白1抗体；膜攻击复合物

登革病毒（dengue virus，DENV）特异性抗体可以通过3种机制清除病毒：病毒中和效应、补体依赖的细胞毒效应和抗体依赖细胞介导的细胞毒效应［1］。然而DENV特异性抗体也可能引起免疫损伤，免疫机制或自身免疫机制可能与DENV感染的致病机制有关［2］。研究表明，DENV非结构蛋白1（nonstructural protein 1，NS1）与病毒感染宿主的血小板和血管内皮细胞存在相似的抗原表位，抗DENV NS1抗体可能破坏宿主的血小板和血管内皮细胞［3］，但其具体机制目前仍不完全清楚。为探讨抗DENV NS1抗体在DENV感染病理机制中的作用，本研究制备了高效价抗Ⅱ型登革病毒（dengue virus type 2，DENV2）NS1抗体，分析该抗体与人微血管内皮细胞1（human microvascu⁃lar endothelial cell 1，HMEC⁃1）的交叉反应性以及激活补体系统的能力，探讨NS1蛋白介导的体液免疫应答在登革出血热的免疫病理机制中的作用。……