过表达miR-29a对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响

刘晓潭，田林强，王宏伟，郭志豪

(新乡医学院第三附属医院骨二科，河南新乡 453003)



过表达miR-29a对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响

刘晓潭，田林强，王宏伟，郭志豪

(新乡医学院第三附属医院骨二科，河南新乡 453003)

目的探讨miR-29a在人椎间盘退变髓核(NP)细胞凋亡的调控作用。方法体外培养椎间盘退变NP细胞，构建重组真核表达质粒cherry/miR-29a，脂质体Lipofectamine转染进入NP细胞，应用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测NP细胞中miR-29a 的表达变化，Western blot 法检测凋亡相关蛋白Caspase-3 前体的表达变化，流式细胞仪检测NP细胞凋亡水平变化。结果NP细胞转染重组质粒cherry/miR-29a 48 h 后，NP细胞中miR-29a 的表达水平较NP细胞和转染空质粒的NP细胞中的miR-29a明显升高(P<0.05)；凋亡相关蛋白Caspase-3前体的水平则明显下降(P<0.05)；NP细胞凋亡水平明显升高 (P<0.05)。结论在椎间盘NP细胞中过表达miR-29a 能促进NP细胞凋亡，其机制可能是通过Caspase-3途径起作用。

椎间盘；细胞凋亡；Caspase-3；过表达；miR-29a；椎间盘退变NP细胞

据相关报道，约80%的老年人患腰痛疾病[1]。其中椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是椎间盘源性腰痛等一系列下腰痛疾病的主要病因，引起负责基质合成的髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡，导致髓核细胞数量减少，是这个病变过程的关键原因[2-4]。所以，通过抑制髓核细胞的凋亡，可能会促进髓核基质的合成，达到延缓椎间盘退变的目的，具有重要的生物学和医学意义。

微小RNA(miRNA) 是一类长度约22 bp的内源性非编码RNA，为生物体内重要的转录后基因调控因子[5]，在生物体细胞增殖与凋亡中发挥重要作用[6]。目前已有研究报道微小RNA-29a(miR-29a) 参与肝癌细胞凋亡的调控[7]，但miR-29a调控椎间盘退变髓核细胞凋亡及其相应的靶基因鲜有报道，本研究通过脂质体lipofectamine转染法使miR-29a成功在体外培养的椎间盘退变NP细胞中过表达，观察miR-29a对凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)前体表达水平的影响，并通过流式细胞仪检测NP细胞的凋亡水平，检测过表达miR-29a对椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响。……