鹿茸活性肽的分离提纯及成分测定

杨阳

（黑龙江省野生动物研究所，哈尔滨　150081）

鹿茸活性肽的分离提纯及成分测定

杨阳

（黑龙江省野生动物研究所，哈尔滨150081）

采用醇沉法、Sephadex G-25层析和TOYOPEARL Giga Cap s-650M层析法分离提纯鹿茸活性肽，得到的鹿茸活性肽纯度较高，为79.397%，分子量为3 000～3 200 Da，并含谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸等14种氨基酸。

鹿茸；活性肽；分离；提纯

鹿茸中含有很多活性物质，传统的加工方法易使鹿茸产品中的活性物质遭到破坏而不能被充分利用，因此采用科学的方法分离提纯鹿茸活性肽成分，并对其进行性质分析，能够提高鹿茸的利用率，促进我国珍贵药材鹿茸的开发和利用。

1　试验材料

梅花鹿二杠鲜茸（冷冻保存）；葡聚糖Sephadex G-25；TOYOPEARLGiga Cap s-650M；超低分子量Marker；乙酸—乙酸钠（HAc-NaAc）；95%乙醇；醋酸—醋酸钠缓冲溶液。

2　试验方法

2.1鹿茸活性肽的粗提

取冻存（-18℃）的梅花鹿二杠鲜茸1 kg，冷冻切片，加入3000mL预先冷却的200μmo1/L pH3.5的醋酸—醋酸钠缓冲溶液，放置过夜。8 500 r/min离心20 min，取上清液，加入95%乙醇使其终浓度达到65%，4℃放置并搅拌，4 h后8 500 r/min离心20 min，取上清，在真空旋转蒸发仪55℃中蒸发，回收乙醇，最终浓缩体积约为400 mL，得到鹿茸粗提物，-20℃保存备用。

2.2鹿茸活性肽的精提

通过查阅资料、预试验，确定通过SephadexG-25层析和TOYOPEARL Giga Cap s-650M层析进行提纯。

2.2.1Sephadex G-25层析

将溶胀好的Sephadex G-25装入处理好的层析柱中（20mm×32cm），选用pH4.0，2mmol/L HAc-NaAc作为流动相，流速为1.5 mL/min，加入鹿茸粗提物5 mL，根据核酸蛋白检测仪显示的数值收集各峰，进行生物活性检测，将免疫活性强的组份进行下一步层析。

2.2.2TOYOPEARL Giga Cap s-650M层析

TOYOPEARL Giga Cap s-650M灌柱（20 mm ×32 cm）后，选用pH 3.6，5 mmol/L HAc-NaAc作为流动相，加入经Sephadex G-25纯化后活性肽，5 mL（经分子量为1 200的透析袋透析浓缩），根据核酸蛋白检测仪显示的数值收集流穿峰，然后分别使用pH 4.0、浓度为0.5和1 mol/L HAc-NaAc溶液洗脱，并收集洗脱峰，进行生物活性检测，收集免疫活性强的组份即为鹿茸活性肽的精提物。……