不同稀释液对检测血清乳酸脱氢酶的影响

方伟祯，何　健，蔡振华，陈　梅，叶远羊（.中山大学孙逸仙纪念医院检验科，广东广州500；.广州中医药大学第一附属医院检验科，广东广州50405；.广州医科大学金域检验学院，广东广州508）

不同稀释液对检测血清乳酸脱氢酶的影响

方伟祯1，何健1，蔡振华2，陈梅1，叶远羊3（1.中山大学孙逸仙纪念医院检验科，广东广州510120；2.广州中医药大学第一附属医院检验科，广东广州510405；3.广州医科大学金域检验学院，广东广州510182）

目的通过比较标本稀释前后血清乳酸脱氢酶（LDH）的变化，探讨不同稀释液对检测血清LDH的影响。方法用AU5800全自动生化分析仪检测标本稀释前后的LDH水平，比较用去离子水、生理盐水和灭活血清3种稀释液稀释同一份高LDH标本后与原始浓度的检测结果，通过绘制回归曲线，比较回归系数接近1的程度。结果2倍稀释时：去离子水回归系数（b水）=1.038 4，生理盐水回归系数（b盐）=1.043 4，灭活血清回归系数（b灭）=1.023 4；5倍稀释时：b水=1.152 9，b盐=1.144 4，b灭=1.142 0；10倍稀释时：b水=1.107 8，b盐=1.112 4，b灭=0.995 8。结论通过2、5、10倍3个稀释梯度的比较，b灭相对b盐、b水最为接近1，说明灭活血清是三者中最好的稀释液。

乳酸脱氢酶；血清；去离子水；生理盐水；稀释液

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于人体所有组织内，以肾含量最高，心肌、骨骼肌次之。但只能在细胞质内找到，正常人组织中LDH水平比血清中高500倍。即使少量组织损伤也可以导致血清中LDH活性显著升高，标本不同程度溶血时，血清LDH均升高［1］。血清LDH水平很大程度上可以反映富含LDH细胞的增殖、代谢等生物学性状［2］。LDH水平增高多见于心肌损伤、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤［3］及白血病［4-5］等，某些肿瘤转移会引起的腹水中LDH活力升高。LDH是目前临床分析疾病的一个重要的生化指标，目前常用于心肌梗死、肝脏疾病和某些恶性肿瘤的临床辅助诊断。

临床上大部分的生化分析仪都有自动稀释功能，目前所用到的稀释液多为去离子水，稀释液也可能是生理盐水、小牛血清等与血清相近的液体。程涌江等［6］发现用生理盐水5倍稀释血清会使血清胆红素测定结果升高。刘成忠等［7］发现，蒸馏水和生理盐水作为高值血清肌酸激酶（CK）的稀释液，所测得值无规律可循，不能作为高值血清CK的稀释液使用。严开斌［8］发现，载脂蛋白A1（ApoA1）和糖化血红蛋白（HbA1c）标本用生理盐水稀释后，无论高值还是正常标本，结果均增高。盛军［9］也发现，用生理盐水稀释高值血清CK时，结果差异显著。而目前鲜见关于用去离子水或生理盐水稀释血清的LDH的检测结果差异是否显著的研究报道，而作者在临床工作中，已发现用不同的稀释液稀释血清标本，会对检测血清LDH结果有不同的影响。通过实验，挑选出对检测结果影响最小的稀释液，对提高临床检验工作的准确性和有效性，减少误差有重要意义。本研究探讨了去离子水、生理盐水、灭活血清3种稀释液对稀释血清中LDH结果的影响。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1待测血清新鲜抽取病区患者静脉血，经离心机3 000 r/min离心后，取肉眼无黄疸、无溶血、无脂浊的血清，量大于1mL，血清LDH水平400～1000U/L，-20℃保存。

1.1.2低值血清抽取中山大学孙逸仙纪念医院患者静脉血，经离心机3 000 r/min离心后，取肉眼无黄疸、无溶血、无脂浊的血清，血清LDH水平小于200 U/L，混合后4℃保存［10］。

1.1.3仪器贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪、微量移液器（200 μL）、微量移液器（40 μL）、水浴箱。

1.1.4试剂LDH测定试剂盒（乳酸底物法）购自贝克曼库尔特实验系统（苏州）有限公司，批号：AWZ1700。稀释液：去离子水、生理盐水、灭活血清。将收集的低值血清混合后，在56℃水浴箱水浴30 min，制成灭活血清，再用作实验的稀释液。

1.2方法

1.2.1收集标本收集待测血清约50份；收集低值血清若干份。

1.2.2检测原始血清和灭活血清LDH水平采用贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪分别检测每份待测血清的原始LDH水平2次，结果取均值；同理检测稀释时的灭活血清LDH水平。

1.2.3稀释方法稀释血清及稀释后血清的检测与原始血清检测同时在相同环境下进行实验；将每一份待测血清分成2份，分别用上述3种稀释液按下列3个稀释倍数稀释，即2倍：100 μL血清+100 μL稀释液；5倍：50 μL血清+200 μL稀释液；10倍：20 μL血清+180 μL稀释液。

1.2.4检测稀释后血清LDH水平采用贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪分别检测稀释后血清LDH水平2次，结果取均值，相同血清来源的血清稀释后相互比较，差值超过全部标本差值均值的4倍为离群值，应剔除，剔除离群值后，其余标本按照相应的公式换算为稀释浓度。

1.3统计学处理应用SPSS22.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用配对资料t检验比较稀释组与原始血清LDH水平的差异，以及3种稀释液间相互配对分析比较差异。比较三组稀释组与原始血清LDH水平的接近程度，本实验以散点图的方法进行比较：以原始血清LDH水平为横坐标，稀释组血清LDH水平为纵坐标，绘制散点图，因横坐标固定，故当横坐标等于纵坐标（散点无限接近斜率为1的曲线）时，可认为稀释组血清LDH水平无限接近原始血清LDH水平。当散点图回归方程y=bx+a中的b=1时，则可认为稀释组血清LDH水平无限接近原始血清LDH水平。

2　结　果

2.1各组不同稀释倍数稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较

2.1.12倍稀释时各稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较2倍稀释时，各组稀释组血清与原始血清LDH水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；生理盐水稀释后血清LDH水平偏离原始血清相对最大（相对偏倚4%），去离子水、灭活血清稀释后LDH水平偏离较小（相对偏倚2%），见表1。

表1　2倍稀释时各稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较（n=45）

2.1.25倍稀释时各稀释组血清与原始血清配对结果比较5倍稀释时，各稀释组血清与原始血清LDH水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；去离子水、生理盐水稀释后血清LDH水平偏离原始血清相对最大（相对偏倚10%），灭活血清稀释后LDH水平偏离较小（相对偏倚8%）。见表2。

表2　5倍稀释时各稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较（n=45）

2.1.310倍稀释时各稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较10倍稀释时，各稀释组血清与原始血清水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；生理盐水稀释后血清LDH水平偏离原始血清相对最大（相对偏倚-10%），灭活血清稀释后血清LDH水平偏离较小（相对偏倚-6%）。见表3。

表3　10倍稀释时各稀释组血清与原始血清LDH水平配对结果比较（n=45）

2.2不同稀释组间统计结果比较无论何种倍数稀释，去离子水与生理盐水稀释后比较，差异均无统计学意义（P≥0.05）；灭活血清无论与去离子水或生理盐水比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。见表4。

表4　不同稀释组间统计结果比较（n=45）

2.3线性关系2倍稀释时，去离子水稀释组回归方程为：y水=1.038 4x-9.39，R2=0.962 8；生理盐水稀释组回归方程为：y盐=1.043 4x-5.38，R2=0.957 4；灭活血清稀释组回归方程为：y灭=1.023 4x-0.71，R2=0.966 2。灭活血清作为稀释液时所得回归方程的回归系数（b灭）最为接近1。5倍稀释时，y水=1.152 9x-33.69，R2=0.918 5；y盐=1.144 4x-28.18，R2=0.931 5；y灭=1.142 0x-44.68，R2=0.943 4。b灭最为接近1。10倍稀释时，y水=1.107 8x-153.03，R2=0.659 2；y盐= 1.112 4x-145.14，R2=0.660 4；y灭=0.995 8x-40.79，R2= 0.671 4。b灭最为接近1。见图1。

图1　回归方程斜率比较图

3　讨　论

目前检测血清LDH一般用连续监测法，使用全自动生化分析仪完成，原理是LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时还原NAD+为NADH。样本中LDH的活性可以通过监测340 nm波长处NADH吸光度上升的速率而获得。LDH升高可见于急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌等肝脏疾病；也可作为急性心肌梗死后期的辅助诊断指标。且在某些血液疾病如白血病、贫血、恶性淋巴瘤等，骨骼肌损伤、进行性肌萎缩、肺梗死等LDH也会升高。在临床工作过程中，较容易遇到超出仪器检测线性范围血清LDH结果异常高的标本，此时必须通过稀释标本来重新检测，因此在选择稀释液方面显得尤为重要［10］。

去离子水与灭活血清、生理盐水与灭活血清均存在着基质的不同，所谓的基质，是指除分析物之外的所有成分，由基质所介导的分析误差则为基质效应，基质误差几乎存在于所有的分析中，当检测分析物时，均会受到“周围物质”的影响，对临床科室而言，主要任务是检测患者的血清标本，因此，只有当稀释液接近血清时，基质效应才能减小。此时，测定系统对新鲜血清标本而言不考虑基质效应，认定该测定系统对新鲜血清标本的基质效应接近于零［11］。从本研究结果显示的去离子水、生理盐水稀释引起的误差无统计学意义，也能反证明影响稀释后LDH水平的原因是基质的改变。

通过本研究可以看出，去离子水、生理盐水、灭活血清3种稀释液稀释血清均会对检测血清中LDH水平引起具有统计学意义的误差。去离子水、生理盐水稀释血清对检测血清中LDH水平引起的误差不具统计学意义；灭活血清稀释血清相对于去离子水和生理盐水所引起的误差相对较小。

比较3种稀释液对检测血清LDH的影响，灭活血清相对于去离子水和生理盐水对血清LDH的影响小，可以认为灭活血清是3种稀释液中效果最好的。当然，不同的检测项目，影响最小的稀释液可能不同，还有待进一步的研究。

［1］胡军红，谢建红，陆岭.标本溶血对血清酶测定影响的研究［J］.吉林医学，2014，35（1）：115-116.

［2］叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，1997：210-245.

［3］王翰林.肺癌患者血清乳酸脱氢酶检测意义［J］.实用预防医学，2010，17（3）：552-553.

［4］张春芳.急性白血病患者乳酸脱氢酶水平的变化研究［J］.亚太传统医学，2011，7（7）：91.

［5］李岭.白血病患者乳酸脱氢酶水平变化及临床价值［J］.社区医学杂志，2008，6（13）：20.

［6］程涌江，李丽，陈海鸣.不同稀释方式对血清胆红素测定结果的影响［J］.临床检验杂志，2010，28（6）：474-475.

［7］刘成忠，肖传宇，侯文华.不同稀释液对高值血清肌酸激酶稀释测定的影响［J］.实用医学杂志，2009，25（14）：2361-2362.

［8］严开斌.不同稀释方式对生化测定结果的影响［J］.临床检验杂志，2009，27（6）：464.

［9］盛军.高值血清肌酸激酶稀释物的选择［J］.临床检验杂志，1992，10 （2）：106.

［10］宋梅花.检测LDH同工酶的血清标本保存法［J］.国际检验医学杂志，1986，30（1）：853-853.

［11］王毓三.基质效应［J］.临床检验杂志，2002，20（增1）：112-115.

Influence of different dilution solutions on serum LDH detection

Fang Weizhen1，He Jian1，Cai Zhenhua2，Chen Mei1，Ye Yuanyang3（1.Department of Clinical Laboratory，Sun Yat-Sen Memorial Hospital of Sun Yet-Sen University，Guangzhou，Guangdong 510120，China；2.Department of Clinical Laboratory，First Affiliated Hospital，Guangzhou Medical University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou，Guangdong 510405，China；3.Jinyu Laboratory Medicine College，Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong 510182，China）

ObjectiveTo investigate the influence of different dilution solutions on serum LDH detection by comparing the changes of serum LDH after specimen dilution.MethodsThe AU5800 automatic biochemical analyzer was used to detect the LDH concentrations before and after specimen dilution.The detection results of the same high LDH specimen were compared between the original concentration and concentrations after dilution by 3 kinds of dilution solutions of deionized water，normal saline and inactivated serum.The degree of regression coefficient（RC）close to 1 was compared by drawing the regression curve. ResultsWhen 2 times of dilutions，RC of deionized water（RCbw）=1.038 4，RC of normal saline（RCbs）=1.043 4，RC of inactivated serum（RCbi）=1.0234；when5timesofdilutions，RCbw=1.1529，RCbs=1.1444，RCbi=1.1420；when10timesofdilutions，RCbw=1.1078，RCbs=1.112 4，RCbi=0.995 8.ConclusionIn the comparison of 2，5，10 of 3-dilution gradients，RCbiis most close to 1compared with RCbs and RCbw，indicating that inactivated serum is the best dilution solution among these 3 kinds of dilution solution.

L-lactate dehydrogenase；Serm；Deionized water；Normal saline；Diluent

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.010

A

1009-5519（2016）14-2143-03

方伟祯（1977-），本科，主管技师，主要从事血液方面研究。

（2016-03-07）