复方氟苯尼考注射液在猪体内的药代动力学研究

张志娟,周丹,钱民怡,朱沛,李道稳,刘晓东,陈婷婷,汤树生(中国农业大学动物医学院,北京海淀100193)

复方氟苯尼考注射液在猪体内的药代动力学研究

张志娟,周丹,钱民怡,朱沛,李道稳,刘晓东,陈婷婷,汤树生
(中国农业大学动物医学院,北京海淀100193)

本文对自制氟苯尼考(FF)和氟尼辛葡甲胺(FM)复方制剂在猪体内的药代动力学进行了研究.试验选用健康断奶仔猪6头(30±5 kg),采用三周期交叉设计,FF给药剂量均为20 mg/kg体重,FM给药剂量均为2 mg/kg体重(以氟尼辛计),同一头猪不同给药的时间间隔为2周,给药途径均为颈部肌肉注射.试验结果显示,自制复方制剂与两种进口市售单方制剂在动物体内的药代过程基本一致,氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺相对生物利用度分别为99.89%和108.78%,表明本复方注射液中两种药物的药效均与国外进口单方产品相当,一次给药即可获得两种进口单方制剂同时给药的良好疗效,且具有方便临床给药、减少动物应激的显著优点.

猪;药代动力学;氟苯尼考;氟尼辛葡甲胺

氟苯尼考(Florfenicol,FF)为新一代氯霉素类兽医专用抗生素,具有抗菌谱广、吸收良好、体内分布广、耐药性发生率低、体内残留量较低的特点,对多种革兰阳性菌和阴性菌及支原体等均有较强活性,是我国兽医临床用于治疗畜禽呼吸道疾病的首选药之一[1-3].然而,由于近年来畜禽呼吸道疾病大都呈多病原混合感染的趋势,常伴有体温升高、炎症及肌肉疼痛等症状,而氟苯尼考单方制剂有效抑杀呼吸道病原菌后,无法清除死亡细菌释放出的内毒素,亦无抗炎镇痛作用.因此,氟苯尼考单方制剂对当前畜禽呼吸道疾病的疗效仍不够理想[4].氟尼辛葡甲胺(Flunixin me⁃glumine,FM)是一种动物专用的非麻醉、非类固醇类的解热消炎镇痛药物,通过抑制环氧酶而阻止前列腺素的合成,减少炎性病变介质的繁殖来发挥抗炎作用,具有良好的抗炎镇痛和抗内毒素作用[5-7].因此,本实验室研制了该复方注射液,并对其在猪体内的药物代谢动力学进行了研究.

1　材料与方法

1.1药品与试剂氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺复方注射液(FF/FM复方注射液),FF 30%,FM 5.5%,本实验室自制;Nuflor(氟苯尼考注射液),FF 30%,先灵葆雅(美国)动物保健公司;Finadyne(氟尼辛葡甲胺注射液),FM 5%,先灵葆雅(美国)动物保健公司; FF对照品,含量98%,中国兽医药品监察所;氟尼辛葡甲胺对照品,含量99%,中国兽医药品监察所;甲醇、乙腈,色谱级,美国Fisher chemical公司;甲酸,色谱级,美国Fisher chemical公司;其他试剂均为分析纯.

1.2主要仪器高效液相色谱仪(2695分离系统,2996二极管阵列检测器)美国Waters公司; XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm),美国Waters公司;N-EVAPTM111型氮吹仪,美国Organomation Associates公司;WH-I型微型漩涡混合仪,北方同正生物技术发展有限公司;MI⁃KR022R型台式高速冷冻离心机,德国Hettich公司;SHK-99-II台式空气恒温摇床,北方同正生物技术发展有限公司.

1.3试验动物及给药方案试验选用健康断奶仔猪6头,体重30±5 kg,于中国农业大学动物房饲养,给药前饲喂不含药物的全价饲料2周以适应环境.试验采用三周期交叉设计,FF给药剂量为20 mg/kg体重,FM给药剂量为2 mg/kg体重(以氟尼辛计),同一头猪不同给药方式的时间间隔为2周.动物随机分成A、B、C 3组,颈部肌肉注射,具体给药方式见表1.

表1　三周期交叉设计

1.4样品采集复方注射液组于给药前和给药后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.75、0.83、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h从猪的颈静脉采血8 mL;氟苯尼考注射液组于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h颈静脉采血4 mL;氟尼辛葡甲胺注射液组于给药前和给药后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.83、1、2、4、6、8、12、24、36、48 h颈静脉采血4 mL,采好的血样放入预先用肝素钠处理好的离心管中,3 000 r/min离心10 min后吸取上清,分装为3管,置于-20℃保存.

1.5血浆样品处理

1.5.1氟苯尼考精密量取0.5 mL血浆,加入4 mL乙酸乙酯,涡动混匀2 min,在摇床上以250 r/min水平摇荡15 min,充分提取药物.然后以0℃,4 500 r/min离心10 min,转移上清液至另一离心管,重复提取和离心一次,合并上清液.将合并后的上清液用45℃氮气吹干,然后用0.5 mL流动相复溶,漩涡2 min混匀溶解,0.22 μm微孔滤膜过滤,取50 μL进HPLC检测.

1.5.2氟尼辛葡甲胺精密量取血浆样品400 μL,依次加入乙腈4 mL、1 mol/L盐酸40 μL,涡动提取2 min后,10 000 r/min(0℃)离心10 min,转移上清液至另一离心管,重复提取和离心一次,合并上清液.将合并后的上清液用40℃氮气吹干,400 μL初始流动相复溶残留物后,漩涡2 min,0.22 μm微孔滤膜过滤,取50 μL进HPLC检测.

1.6色谱条件

1.6.1氟苯尼考流动相:乙腈:水=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;检测波长:224 nm;进样量: 50 μL;色谱柱:XBridge Shield RP C-18柱(250 X 4.6 mm,5 μm);HPLC系统:Waters 600-717-2487系统;柱温:30℃±5℃.

1.6.2氟尼辛葡甲胺流动相:0.2%甲酸水:乙腈=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;检测波长:276 nm;进样量:50 μL;色谱柱:XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm);HPLC系统:Waters 2695分离系统;柱温:30℃±5℃.

1.7标准曲线

1.7.1氟苯尼考标准曲线配制FF浓度分别为18,10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血浆添加样品,按照1.5.1处理方法处理后上样,记录色谱图和峰面积.

1.7.2氟尼辛葡甲胺标准曲线配制FM浓度分别为10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血浆添加样品,按照1.5.2处理方法处理后上样,记录色谱图和峰面积.

1.8数据处理对获得的FF和FM血浆药物浓度-时间数据用Phoenix WinNonlin 6.1药代动力学软件进行分析,并计算主要的药动学参数,然后用SPSS软件的单因素方差分析程序对药代参数进行差异显著性分析.

2　结果

2.1检测方法

2.1.1氟苯尼考检测方法FF在浓度为0.1～18 μg/mL范围内标准曲线线性关系良好(r=0.9996);回收率为92.62%～101.63%;日内变异系数为1.97%～5.49%,日间变异系数为1.86%～4.29%;检测限为0.05 μg/mL,定量限为0.1 μg/mL.

2.1.2氟尼辛葡甲胺检测方法FM在浓度为0.1～ 10 μg/mL范围内标准曲线线性关系良好(r=0.9999);回收率为99.56%～100.31%;日内变异系数为2.17%～5.35%,日间变异系数3.25%～4.87%;检测限为0.05 μg/mL,定量限为0.1 μg/mL.

2.2药代动力学试验

2.2.1血浆测定结果猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和FF单方注射液后的FF血药浓度及药时曲线图见图1;猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和FM单方注射液后的FM血药浓度及药时曲线图见图2.从图1和图2可以看出,本实验室研制的FF/FM复方注射液的FF和FM均与其单方进口制剂的相应药物在猪体内的药物动力学行为表现极为相似.

图1　猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和FF单方注射液后的FF血药浓度(n=6)

图2　猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和FM单方注射液后的FM血药浓度(n=6)

2.2.2药代动力学参数将试验所得的血药浓度-时间数据用Phoenix WinNonlin 6.1药代动力学软件处理,两药的主要药动学参数及其差异显著性检验结果见表2和表3.从表2和表3可以看出,本实验室研制的FF/FM复方注射液的FF和FM与其单方进口制剂相应药物的主要药代动力参数均无显著性差异,其中FF和FM的相对生物利用度分别为99.89%和108.78%.

表2　猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和单方注射液后的FF的药物动力学参数(n=6,±S)

表3　猪颈部肌肉注射FF/FM复方注射液和单方注射液后的FM的药物动力学参数(n=6,±,S)

3　讨论

3.1检测方法的建立本试验以《中华人民共和国兽药典》(2010年版)为基础,查阅国内外相关文献[8-15]后,建立了检测血浆中FF和FM含量的检测方法,所建方法较好地实现了药峰与杂质峰的良好分离,空白血浆对药物出峰无干扰,同时,所建方法能良好满足分离度、线性关系、回收率、变异系数等要求,且具有快速、方便、稳定的特点.

关于血浆中FM的提取方法,大多文献[11-14]用盐酸和乙腈或磷酸盐缓冲液和乙腈等作为蛋白沉淀剂.考虑到FM的弱酸性,本研究选用盐酸和乙腈作为提取液,并比较了盐酸和乙腈的加入顺序对提取效率的影响.结果表明,盐酸和乙腈加入血浆的先后顺序虽对FM的提取效率显著影响,但先加入盐酸可致血浆产生大量炭,导致上机检测样品达不到色谱级要求,因此提取时应先加乙腈,再加盐酸.此外,提取时如只提取1次则回收率仍达不到要求,本研究尝试了用同样提取液提取两次并合并提取液的方法,最终回收率达到要求.

3.2药动学先灵葆雅(美国)动物保健公司生产的Nuflor是治疗畜禽呼吸道疾病疗效较好的单方氟苯尼考注射液[3,16],该公司生产的氟尼辛葡甲胺单方注射液(Finadyne)亦因其抗炎镇痛和抗内毒素作用良好在国内外兽医临床获得广泛运用[17],因此,本文选用上述两药作为本实验室自制FF/FM复方注射液的对照药物.本文的药代动力学试验结果显示,肌肉注射本实验室自制FF/FM复方注射液以及注射Nuflor和Finadyne单方注射液后,本实验室自制FF/FM复方注射液的FF和FM与其单方进口制剂相应药物的半衰期、达峰时间、达峰浓度、药时曲线下面积等主要药代动力参数均无显著性差异,其中FF和FM的相对生物利用度分别为99.89%和108.78%,即自制复方制剂中氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺均与市售进口相应单方制剂在动物体内的药代过程基本一致,表明本复方注射液在方便临床给药、减少动物应激的同时,良好地保持了氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺的药效,一次给药即可获得两种进口单方制剂同时给药的良好疗效.

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Pharmacokinetic study on a florfenicol/flunixin meglum ine com pound injection in sw ine

ZHANG Zhi-juan,ZHOU Dan,QIAN Min-yi,ZHU Pei,LI Dao-wen, LIU Xiao-dong,CHEN Ting-ting,TANG Shu-sheng
(College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China)

The pharmacokinetics of the florfenicol/flunixin meglumine(FF/FM)compound injection prepared in our lab was studied in pigs in this paper.Six healthy pigs(30±5 kg)were used in this experiment with three cycles of cross.The dose of FF was 20 mg/kg while FM was 2 mg/kg(by flunixin).The animals were administered by IM in neck with a two-week-cycle.The result showed that,for both FF and FM,the pharmacokinetic parameters of the FF/FM compound injection were similar with their single prescription preparation(Nuflor and Finadyne).The relative bioavailability was 99.89%for FF and 108.78%for FM.Therefore, the FF/FM compound injection prepared in our lab exhibit the excellent effect of both drugs while it is more convenient to be used in practice and induces less animal stress.

swine;pharmacokinetics;florfenicol;flunixin meglumine

TANG Shu-sheng

S858.28

A

0529-6005(2016)02-0102-04

2014-09-09

公益性行业科研专项"新型动物专用药物的研制与应用"(201303038)

张志娟(1989-),女,硕士,主要从事兽药新制剂研究,E-mail:zhangzhijuan369@163.com

汤树生,E-mail:tssfj@163.com