快速制作LIAISON化学发光孕酮测定标准曲线的方法

陈怡娟,郭　渝,王婉蝶,黄靖轩

(成都双楠医院检验科　610041)



快速制作LIAISON化学发光孕酮测定标准曲线的方法

陈怡娟,郭渝,王婉蝶,黄靖轩

(成都双楠医院检验科610041)

目的通过每日定标快速手工制作标准曲线的方法，使孕酮测定结果的准确性得到保证。方法根据LIAISON化学发光计算原理和孕酮的标准曲线，借用Excel软件的对数回归方程快速计算孕酮实际的标准曲线，对该试验进行校准。结果通过该方法计算得出的浓度值符合临床诊断。结论该方法简便、快速、准确，得到临床科室的认可，值得在基层医院推广应用。

孕酮；标准曲线；化学发光；数学模型

意大利LIAISON全自动化学发光分析仪测定孕酮的方法为竞争法，标准品为外定标，按试剂说明书要求每盒100人份试剂均需要外定标。在实际操作过程中，虽然严格按照试剂说明书的要求外定标与厂家设定的主反应曲线比对后定标通过，但随试剂开封后时间延长实际测得的孕酮值不稳定，与临床诊断有偏差。为此，作者根据LIAISON全自动化学发光分析仪的使用说明书和孕酮试剂说明书利用Excel软件，每次测定均进行外部定标并绘制测定的标准曲线，极大提高了该实验的稳定性和准确性。现将此方法的详细过程介绍如下：

1　材料与方法

1.1仪器与试剂意大利LIAISON化学发光分析仪、孕酮试剂盒、孕酮外部定标品(2 ng/mL，20 ng/mL)。

1.2方法

1.2.1按照LIAISON使用说明书进行实验前的准备工作，即冲洗管路和进行光路检测。要求光路检测后的值符合要求才能进行试验。即：空白孔相对光单位在120～320，变异系数在8%以内；左右针的相对光单位在20 000～180 000，变异系数在2.5%以内，且左右针的相对光单位差值在8 000之内。

1.2.2将定标品复温编号为8000(2 ng/mL定标品)、8001(20 ng/mL定标品)，放置在“A”标本架上并放入仪器样品仓中进行检测，8000号相对光单位：136538，8001号相对光单位：44381。

1.2.3绘制标准曲线

1.2.3.1输入试验数据启动Excel电子表格，建立一个名为“孕酮”的文件，将工作表重命名为当天日期。用表2的试验结果，在A1：D1单元格分别输入编号、浓度、RLU、待测血清浓度。A2：C2单元格输入8000号的编号、浓度、RLU，A3：C3单元格输入8001号的编号、浓度、RLU。

1.2.3.2绘制标准曲线用鼠标点击Excel电子表格软件“插入”菜单→图表→标准类型→XY散点图→散点图，在图形方框中点右键“选择数据”→添加→“X轴系列值”选择C2：C3单元格的数据→“Y轴系列值”选择B2：B3单元格的数据→确定。根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线：先点击图上标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。添加对数回归方程，点击趋势线(即标准曲线)，然后按右键，选“趋势线格式”，在弹出的对话框中，选择“选项”，在“显示公式”和“显示R平方值”前打勾，再点“确定”，回归方程式和相关系数即在标准曲线上显示出来。

2　结　　果

2.1孕酮检测的标准曲线通过上述步骤，计算机已绘制出“孕酮测定的标准曲线”，见图1。从图中的回归方程式可以看出，r2=1，说明趋势线可靠，可作为标准曲线用于其他未知浓度的测定。

图1　　孕酮检测的标准曲线

2.2待测血清的浓度检测在D4单元格输入通过回归方程式所得的函数“=-16.0*ln(C4) + 191.3”，选中D4单元格在D列向下拖动，扩展序列。在A列和C列分别键入待测血清的序列号和RLU值，即可得到待测血清的浓度，再将D列设置成“数值”、小数点后保留一位，见图2。

图2　　待测血清浓度的计算

3　讨　　论

血清孕酮在先兆流产的诊断、预后预测及治疗效果评定中有着重要的地位，是临床常用指标[1-2]。妊娠早期血清孕酮主要来源于妊娠黄体的分泌，妊娠8～10 周后胎盘取代卵巢黄体成为血清孕酮的主要分泌来源，且各孕龄的孕酮水平基本保持平稳[3-4]。一定水平的孕酮对妊娠的维持有重要作用，孕酮水平不足是导致先兆流产或难免流产的重要原因。因此，保证孕酮浓度测定的准确性是非常重要的。

意大利LIAISON化学分析仪采用化学发光方法来测定孕酮，随化学发光试剂开封后时间的延长及环境变化等因素影响对测定的结果误差较大。使用本文所述的方法，通过每批次定标，计算对数回归方程绘制标准曲线，避免了环境因素造成的仪器检测过程中的误差，与说明书要求的每盒试剂定标一次相比，提高了孕酮检测的准确性，得到临床科室的认可。该方法简便、快速、可靠，值得在基层医院推广应用。

[1]朱英哲，徐泽媚，杨晓葵.妊娠早期妇女血清性激素水平及与先兆流产的关系[J].中国实验诊断学，2011，15(10)：1677-1679.

[2]Kirby JM，Cho KJ，Midia M.Image-guided Intervention in management of complications of portal hypertension：more than TIPS for success[J].Radiographics，2013，33(5)：1473-1496.

[3]杨亚滨，张艳梅，索磊.血清孕酮、HCG 联合检测在早期先兆流产中的临床意义[J].中国优生与遗传杂志，2013，21(1)：52，76.

[4]Mäkikallio K，Tekay A，Jouppila P.Effects of bleeding onuteroplacental，umbilicoplacental and yolk-sac in hemodynamics early pregnancy [J].Ultrasound Obstet Gynecol，2001，18(4)：352-356.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.061

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1673-4130(2016)16-2344-02

2016-03-18

2016-06-09)