GTP结合蛋白4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定*

刘勋，陈明，杨志惠

（西南医科大学附属医院病理科，四川泸州646000）

GTP结合蛋白4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定*

刘勋，陈明，杨志惠

（西南医科大学附属医院病理科，四川泸州646000）

目的:为了建立GTPBP4基因沉默的人结肠癌细胞株，研究GTPBP4基因对人结肠癌细胞株RKO细胞增殖和凋亡的影响，构建并鉴定GTPBP4基因RNA干扰慢病毒载体。方法：针对GTPBP4 mRNA设计siRNA，构建pGCSIL-GFPGTPBP4慢病毒载体，感染293T细胞，包装产生慢病毒，并进行滴度测定。将慢病毒转染人结肠癌细胞株RKO，通过Realtime PCR和Western Blot分析GTPBP4基因敲减效率。结果：结果显示，插入DNA序列与目的基因序列一致，提示插入人GTPBP4基因序列正确。293T细胞中病毒滴度的测定结果2×108 TU/mL。经siRNA慢病毒感染后，实验组RKO GTPBP4基因mRNA水平表达量受到显著抑制，Western Blot结果显示敲减效率达到72.9%。结论:GTPBP4基因RNAi慢病毒载体构建成功，可用于结肠癌生物行为等各方面的研究。

GTPBP4基因；RNA干扰；慢病毒载体；结肠癌

GTP结合蛋白4（GTP binding protein4，GTPBP4）基因，位于人染色体10p15-p14，基因库编号：DQ496111.1，是一条长12285bp的线性DNA序列[1]。该基因编码的蛋白为GTP结合蛋白，其作为一个分子开关，存在激活和失活两种状态。该蛋白参与60S核糖体亚基的生物合成。有报道称该基因与乳腺癌，白血病耐药性等有关[2]。在野生型P53相关性的乳腺癌中，GTPBP4表达的增高与患者生存率降低相关[3]。课题组前期实验结果显示结肠癌癌组织中GTPBP4 mRNA表达水平显著高于癌旁组织，为进一步了研究GTPBP4在结直肠癌发生发展中的作用，本研究拟构建人GTPBP4 RNA干扰（RNA inter-ference，RNAi）慢病毒载体并进行鉴定为后续结肠癌的相关研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料