3种食源性致病菌的实时荧光PCR快速检测

霍胜楠，孟静，杨振东，郑世超，张然（.山东省食品药品检验研究院，山东济南500；.江南大学食品学院，江苏无锡4）

3种食源性致病菌的实时荧光PCR快速检测

霍胜楠1，孟静1，杨振东2，郑世超1，张然1
（1.山东省食品药品检验研究院，山东济南250101；2.江南大学食品学院，江苏无锡214122）

DNA提取方法采用先钢珠机械破坏细菌细胞壁，再添加丙酮、蛋白酶K溶解去除杂质，大大提高了食源性致病菌基因组DNA的得率和纯度。继而针对金黄色葡萄球菌egc基因、沙门氏菌NA（not availabale）基因、志贺氏菌ipaH基因为靶基因设计特异性引物对样品建立实时荧光定量PCR检测方法。结果试验设计的引物对3种细菌具有很强特异性，除目标细菌外，对单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌3种对照菌均未检测到荧光信号。对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌的检测灵敏度分别达到10-6、10-6、10-7ng/μL。

食源性致病菌；基因组DNA提取；实时荧光定量PCR

食源性致病菌主要引起食源性疾病，对人类健康造成极大的伤害，是食品安全的重大隐患。已报道的食源性致病菌已经超过250种［1］，沙门氏菌［2］、金黄色葡萄球菌［3］、志贺氏菌［4］等都是肆虐流行的重要食源性致病菌。食源性致病菌的检测技术是食源性疾病与控制的关键环节。目前包括中国在内的许多国家对这些致病菌的检验大多仍沿用传统的细菌培养及生化鉴定方法，其检验周期长、操作繁琐、灵敏度低，很难适应公共卫生事件应急处理快速反应的需要［5］。实时定量荧光PCR能克服以上缺点，检测在一个密闭环境中进行，无污染和后处理风险，可以快速、准确检测目标核酸，达到定量检测食品中致病菌的目的［6］。……