市售山银花的质量考察

黄　浩，银胜高，邱淑智，李红菊，顾敬文（.广西中医药大学，广西南宁53000；.广西中医药大学附属瑞康医院，广西南宁5300）

市售山银花的质量考察

黄浩1，银胜高1，邱淑智1，李红菊2，顾敬文1
（1.广西中医药大学，广西南宁530001；2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西南宁530011）

［目的］检测市售山银花的质量，为临床安全用药提供参考。［方法］采用高效液相色谱法对山银花中绿原酸进行含量测定；并按2015版《中华人民共和国药典》方法对10批市售山银花样品中的水分、总灰分、酸不溶性灰分等进行检测。［结果］所测得的样品中绿原酸的含量均超过2.0%；水分均小于12.0%；总灰分测定值均小于10.0%；酸不溶性灰分测定值均小于3.0%。［结论］10批市售山银花样品的各项指标均符合2015版《中华人民共和国药典》要求。

山银花；绿原酸；水分；总灰分；酸不溶性灰分；HPLC；质量控制

山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）、红腺忍冬（Lonicera hypoglauca Miq.）、华南忍冬（Lonicera confuse DC.）或黄褐毛忍冬（Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng）的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒、疏散风热的功效，临床用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、瘟病发热［1］。山银花为常用的中药材之一，也是药材市场销售的重要品种。由于市场竞争激烈，中药材以次充好、增加水分、药材替换、人为加重等现象时有发生，为了考察市售山银花的质量情况，为临床安全用药提供参考，本实验以广西玉林药材市场上出售的山银花为研究对象，按《中华人民共和国药典》规定对其进行质量控制相关研究，现将结果报道如下。

1　实验材料

1.1试药绿原酸对照品由中国生物制品检定所提供（批号：110753-200413），10批山银花样品于2015年5月购自广西玉林市药材市场，经广西中医药大学廖月葵高级实验师鉴定，均为红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.的花或花蕾。

1.2试剂乙腈（色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司）；甲醇（分析纯，天津四友生物医学技术有限公司）；超纯水；其他试剂为分析纯。

1.3仪器Agilent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦），CG-16W高速微量离心机（北京医用离心机厂）；SB3200T超声波清洗仪（上海能信超声有限公司）；BP211D电子分析天平（德国塞多利斯）；101A-3E电热鼓风干燥箱（上海实验仪器厂）；LSY电热恒温水浴锅（北京市医疗设备厂）；SX2-4-10型箱式电阻炉（上海试验仪器厂有限公司）。

2　实验方法与结果

2.1水分测定取各样品一式两份，每份约5 g，精密称定，将各称定样品平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，打开瓶盖在100～105℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30 min，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品含水量（%）。结果如表1所示。

2.2总灰分测定将供试品粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品5 g，精密称定，置炽灼至恒重的坩埚中，缓缓炽热，注意避免燃烧，逐渐升高温度至600℃，使完全灰化至恒重，根据残渣重量，计算供试品中灰分的含量（%）。结果如表1所示。

2.3酸不溶性灰分测定取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入约10%盐酸，用表面皿覆盖坩埚，置水浴加热10 min，表面皿用热水5 ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重，根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。结果如表1所示。

2.4绿原酸测定

2.4.1色谱条件色谱柱：Agilent液相C18色谱柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；柱温：35℃；检测波长：327 nm；流速：1 ml/min。

2.4.2试液的制备

2.4.2.1对照品溶液的制备取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 ml含88.4 μg的溶液，即得（10℃下避光保存）。

2.4.2.2供试品溶液的制备精密称取各山银花样品粉末（过四号筛）0.5 g，精密称定，分别置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密吸取续滤液5 ml，置25 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

表1　山银花水分、总灰分及酸不溶性灰分测定结果

2.4.2.3阴性溶液以上述实验同一50%甲醇溶液为阴性溶液，作为阴性对照。

2.4.3系统适应性试验分别精密吸取阴性溶液、对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，如图1所示。表明阴性对照在绿原酸出峰处无干扰。

2.4.4线性关系考察分别精密吸取绿原酸对照品溶液（0.0884 μg/μl）1 μl、2 μl、4 μl、8 μl、10 μl、12 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，每样品平行测定2次，以峰面积A对进样量C（μg）进行回归，得标准曲线方程：A= 1 434.2 C，r=0.9999，表明绿原酸在0.0884～1.3260 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.5精密度试验精密吸取同一供试品溶液（1号样品）10 μl，按上述色谱条件连续进样6次，测定绿原酸峰面积RSD为0.23%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.4.6稳定性试验取新鲜配制的本品供试品溶液（1号样品），室温下放置，分别在0 h、2 h、6 h、12 h、20 h、25 h、48 h精密进样10 μl，结果峰面积RSD为0.34%（n=7），表明供试品溶液在48 h内稳定。

图1　山银花高效液相色谱图

2.4.7重复性试验取同一批号样品（1号样品），按供试品溶液的制备方法，制得6份供试品溶液，分别精密进样10 μl，每样品平行测定2次，将测定所得的峰面积代入上述线性回归方程中计算，得到该样品中绿原酸的平均百分含量为3.62%，RSD为1.28%（n=6），表明本方法重现性良好。

2.4.8加样回收试验取已知含量（绿原酸的百分含量为3.58%）的山银花样品粉末（1号样品），（过四号筛）约0.25 g、 0.50 g、0.75 g，每式重量3份，精密称定，分别加入绿原酸对照品溶液10 ml、20 ml、30 ml，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，并按上述方法进行测定，测得平均回收率为98.59%，RSD=1.01%（n=9），表明本法具有良好的回收率。结果如表2所示。

表2　加样回收率试验结果（n=9）

2.4.9绿原酸含量测定分别精密称取各药材粉末一式两份，按2.4.2.2项制备成供试品溶液，进样10 μl按2.4.1项色谱条件进行测定。结果见表3。

表3　样品含量测定结果表（n=2）

3　小结与讨论

3.1本实验采用高效液相色谱法对山银花中绿原酸进行含量测定，方法学考察结果良好，操作简便，重复性好，表明该法可作为山银花中绿原酸的质量控制手段。

3.2本实验结果表明，10批市售山银花的水分含量为8.12%～9.02%；总灰分含量为5.28%～5.68%；酸不溶性灰分含量为0.16%～0.36%；绿原酸指标性成分含量为2.58%～3.99%，含量最高的是湖南产的样品，其次是广西马山产的样品，最低的是钦州产的样品。各项检测指标均符合药典要求。

3.3本次检测的10批市售山银花有5批为熏硫货品，检测结果表明，熏硫山银花中绿原酸含量明显比同一产地未熏硫的山银花中绿原酸含量低。中药材熏硫是传统中药材的加工与储藏技术，主要在流通贮藏阶段起到干燥、防霉和杀虫的作用。由于熏硫的药材较容易保存，因此市场上流通的熏硫中药材较为常见，但过度的熏硫会使药材中二氧化硫残留量超标，对人体健康有一定影响［2］。因此，笔者建议加强科学监管，避免滥用和过度使用硫熏法加工山银花，大规模生产或具备条件的可采用脱水干燥法或烘烤法对山银花进行加工，这些方法加工得到的山银花成色好，且药效成分较高［3-5］。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化学工业出版社，2015:28.

［2］程明，冯学锋，杨连菊，等.硫磺熏制在中药材加工和贮藏中的应用探讨［J］.中国中医药信息，2010，17（S）:18-19.

［3］王柳萍，辛宁，张守平，等.广西不同产地与加工方法山银花中绿原酸的含量比较［J］.时珍国医国药，2008，19（6）: 1370-1371.

［4］张玲容，周日宝.产地加工方法对山银花药材品质的影响［J］.湖南中医药大学学报，2011，31（3）:41-43.

［5］王芳，王小平，黎丹，等.不同加工方法对山银花中主要成分含量的影响［J］.广东药学院学报，2015，31（4）:466-469.

（编辑陈明伟）

R284.1

A

2095-4441（2016）01－0075－03

2016-01-20

广西科学研究与技术开发计划项目（编号：桂科重1298001-1-7）

银胜高，硕士，副教授，从事中药质量控制与标准研究，E-mail:51262905@qq.com