转录因子SOX2、SOX4和SOX9与早期乳腺癌的关系探讨

翟梅娟，付琼，孙丽君，刘红胜

（杭州市萧山区第一人民医院，浙江 杭州311200）

转录因子SOX2、SOX4和SOX9与早期乳腺癌的关系探讨

翟梅娟，付琼，孙丽君，刘红胜

（杭州市萧山区第一人民医院，浙江 杭州311200）

目的 探讨转录因子SOX2、SOX4、SOX9与早期乳腺癌的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测SOX2、SOX4、SOX9在40例乳腺普通型导管上皮增生 （UDH）、78例导管原位癌 （DCIS）中的表达。 结果 UDH中，SOX2、SOX4不表达，SOX9低表达；低中级别DCIS组及高级别DCIS组的SOX2、SOX4、SOX9表达均高于UDH组，差异均有统计学意义（P＜0.01），其中SOX4在DCIS低中级别与高级别之间差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 SOX转录因子与乳腺恶性肿瘤的发生发展有一定的关系，SOX4在细胞的进一步恶性转化中发挥作用。

乳腺肿瘤；转录因子；免疫组织化学

随着对乳腺癌发生、发展机制的深入研究，乳腺癌干细胞学说日益受到重视。转录因子（transcription factors，TFs）的调控网络已经成为目前生命科学研究领域中的一大重点和热点，这些作用原件不仅在体细胞基因表达中扮演了重要角色，对于干细胞状态的维持等方面也发挥了关键的作用［1］。SOX（SRY-related high-mobility-group box）基因是近年来倍受关注的一类编码转录因子的发育基因，与恶性肿瘤的发生发展有一定的关系。本研究采用免疫组织化学在蛋白层面检测 SOX2、SOX4、SOX9这三种基因在乳腺导管上皮普通型增生（UDH）、乳腺各级别导管原位癌（DCIS）组织中的表达差异性，探讨SOX转录因子家族相关基因与乳腺癌早期病变形成的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择杭州市萧山区第一人民医院2009～2014年经术后病理确认的乳腺普通型导管上皮增生40例，导管原位癌78例，均为女性。普通型导管上皮增生患者平均年龄（49.88±1.27）岁，导管原位癌患者平均年龄（52.03±1.17）岁。组织学分级根据“WHO乳腺肿瘤组织学分类”［2］：低级别11例，中级别30例，高级别37例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 采用SP法染色，兔抗人SOX2，即用型，克隆号SP76，购自上海基因生物技术有限公司，肺鳞状细胞癌细胞为阳性对照。鼠抗人单克隆抗体SOX9，克隆号ab76997，购自Abcam（香港）有限公司，浓度为1：700，扁桃体组织为阳性对照。兔抗人多克隆抗体SOX4，克隆号ab86809，购自 Abcam（香港）有限公司，浓度为1：300，脑胶质瘤为阳性对照。免疫组化染色按产品说明书进行，以PBS代替一抗作为空白对照。

1.2.2 结果判定 SOX2蛋白定位于细胞核，判读方法：根据肿瘤细胞中着色细胞所占的比例，0为0分，1%～9%为1分，10%～49%为2分，≥50%为3分，以0分为阴性表达，1～3分为阳性表达进行数据统计；SOX9蛋白着色于细胞浆或细胞核，以着色深浅来判读：无着色为0分，浅褐色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，以无着色为阴性表达，着色即为阳性表达；SOX4以细胞核出现浅棕、棕黄或棕褐色即为阳性表达，反之为阴性。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行数据处理和分析，率的比较采用χ2检验。

2 结果

UDH中SOX2、SOX4均阴性表达、SOX9有8例呈阳性表达（低表达），DCIS中SOX2、SOX4、SOX9出现阳性表达及表达比例升高，三者在UDH与DCIS中表达差异有统计学意义 （P＜0.01），SOX4在低中级别和高级别DCIS比较差异有统计学意义 （P＜0.05）。见表1及图1～3。

表1 UDH与DCIS中SOX2、SOX9和SOX4的阳性表达（n，%）

图1 乳腺中级别导管原位癌，SOX2表达细胞核。（SP法×200）

图2 乳腺高级别导管原位癌，SOX9表达细胞核。（SP法×200）

图3 乳腺低级别导管原位癌，SOX4表达细胞核。（SP法×200）

3 讨论

DCIS占乳腺癌病例的20%～30%［3］，10年生存率约88%［4］，及时发现DCIS是癌症早期诊断与治疗的目标。目前临床用于鉴别DCIS和UDH的标记物十分有限，寻找适合的免疫标记物为乳腺癌早期筛查和生物学防治具有十分重要的意义。

研究显示SOX2基因与Oct3/4、c-Myc和Klf4结合，可以在胚胎和成人纤维母细胞中诱导干细胞发挥发育全能特性［5］，提示SOX2是维持干细胞特性的重要基因。SOX9基因可以调节干细胞稳态的维持及干细胞定向分化之间的平衡，预示着SOX9的异常表达可能是引发恶性病变的潜在因素。SOX4基因的异常表达与多种类型的肿瘤发生有关，其通过调节上皮-间质转化（EMT）过程而促进乳腺癌进展，并可作为一项判断预后的新生物标记。

本文UDH与DCIS的表达结果显示，在40例UDH中，SOX2、SOX4不表达、SOX9 20%呈低表达；在78例DCIS中，低中级别DCIS组和高级别DCIS组的SOX2、SOX4、SOX9表达均高于UDH组，说明SOX2、SOX4、SOX9参与了乳腺癌的早期形成，在乳腺癌形成早期可能已经存在数量不等、具有干细胞特征的多能性低分化或未分化细胞，它们的异常表达可能是引发恶性病变的潜在因素，也佐证了肿瘤可能来源于成体干细胞恶性转变的学说；本结果还提示，SOX2和SOX9在低中级别与高级别中表达无显著性差异，高级别DCIS组的SOX4表达高于低中级别DCIS组，提示SOX4在细胞的进一步恶性转化中发挥作用。

低级别DCIS与UDH的常规组织学形态在光镜下鉴别非常困难，往往需要通过免疫组化标记来辅助诊断。目前的免疫标记物主要有CK5/6、ER等，通过转录因子SOX2、SOX4、SOX9三者在UDH 与DCIS中的表达情况比较，发现两组的表达差异有统计学意义。因此，三者的联合应用对乳腺癌早期病变的诊断和鉴别诊断提供了新的方法。SOX2、SOX4、SOX9三者中，SOX2为核着色，易识别、操作和判定，可重复性强，更适合用作UDH与DCIS的鉴别标记物，与CK5/6、ER联合使用可进一步提高低级别DCIS的诊断正确率。

［1］Guo W，Keckesova Z，DonaherJL，etal.Slug and Sox9 cooperatively determine the mammary stem cell state.Cell，2012，148（5）:1015

［2］Lakhani SR，Ellis IO，Schnitt SJ，et al.WHO classification of tumors，Pathology＆ genetic.Tumors of the breast and rdmage gential organs.3rd ed.Lyon:IARC Press，2012：1

［3］余海云，李文萍，王颀，等.城市群体妇女2006-2011年乳腺癌筛查效果评估.中华肿瘤防治杂志，2013，20（12）：894

［4］ Kerlikowske K.Epidemiology of ductal carcinoma in situ.J Natl Cancer Inst Monogr，2010，2010（41）：139

［5］Takahashi K，Yamanaka S.Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell，2006，126（4）:663

杭州市萧山区重大科技攻关项目（2013302）