HPLC法测定地肤子中芦丁和槲皮素的含量

肖作奇 文晓柯 欧阳波 黄 懿田 霞 潘 涛

湖南省妇幼保健院药学部，湖南长沙410008

HPLC法测定地肤子中芦丁和槲皮素的含量

肖作奇 文晓柯 欧阳波 黄 懿田 霞 潘 涛

湖南省妇幼保健院药学部，湖南长沙410008

目的建立测定地肤子药材中芦丁和槲皮素含量的方法。方法采用高效液相色谱法结合二极管阵列检测器，选用Agi1ent TC-C18色谱柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸（梯度洗脱），检测地肤子中芦丁和槲皮素的含量。结果芦丁和槲皮素的线性范围分别为0.0017～0.0532 mg/mL和0.0011～0.0340 mg/mL，平均加样回收率分别为98.5%、97.88%（RSD=1.57%、1.87%）。芦丁和槲皮素的平均含量分别为0.0592、0.0215 mg/g。结论该方法简单易行，稳定性和重复性好，可用于地肤子中芦丁和槲皮素的含量测定。

地肤子曰高效液相色谱曰含量测定曰芦丁曰槲皮素

地肤子具有清热利湿、祛风止痒等功效，用于小便涩痛、皮肤瘙痒等症［1］，还具有抗炎、抗病原微生物、抗虫等作用［2-7］，多用于湿疹等皮肤病的治疗。化学成分研究结果表明，其主要有效成分为皂苷和黄酮［8-11］。现阶段，对地肤子的质量控制主要是地肤子皂苷Ⅰc的含量测定［1］，但对黄酮含量的测定方法无报道。本研究采用HPLC对不同产地的地肤子中的芦丁和槲皮素的含量进行测定，为进一步控制地肤子质量提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子分析天平（Mett1er To1edo，d=0.01 mg），超声清洗器（上海科导），高效液相色谱仪（岛津，LC-20A型），色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，Agi1ent TC-C18）。

1.2 药品和试剂

水（娃哈哈纯净水），乙腈、甲醇（Tedia，色谱纯），其他试剂均为分析纯。对照品购自上海诗丹德生物技术有限公司（芦丁，批号：3920，纯度99.3%；槲皮素，批号：3467，纯度98.6%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agi1ent TC-C18色谱柱，流动相A为乙腈，B为0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱程序见表1，DAD检测波长200～400 nm，总流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温25℃。

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液制备取地肤子过40目筛粉末2.0 g，称定，置于100 mL具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇20 mL，密封，称重，浸泡30 min，超声处理30 min，取出后放至室温后再次称定重量，加80%乙醇补足损失重量，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液制备精密称取芦丁和槲皮素对照品各适量，分别置于25 mL容量瓶中，加色谱甲醇溶解并定容，摇匀，即得芦丁和槲皮素对照品贮备溶液。同法配制混合对照品溶液，使每毫升溶液中含芦丁0.0133 mg、槲皮素0.0085 mg。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析。结果见图1。芦丁和槲皮素理论塔板数均大于5000、分离度大于1.5、拖尾因子在0.95～1.05之间，符合含量测定要求。

图1 地肤子和混合对照品HPLC图（λ=370 nm）

2.4 线性关系考察

配制系列浓度的对照品溶液进行HPLC测定，进样量10 μL，得到芦丁和槲皮素的线性方程回归方程分别为：Y=2.256×107X-1108，r2=0.9999，线性范围为0.0017～0.0532 mg/mL；Y=6.783×106X-808.2，r2=0.9996，线性范围为0.0011～0.0340 mg/mL。

2.5 精密度试验

取“2.2.2”项下所制备的对照品溶液，适当稀释，按“2.1”项下条件分别重复进样6次，进样量10 μL，测得芦丁峰面积RSD=0.6%，槲皮素峰面积RSD= 0.7%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批次地肤子粉末，按“2.2.1”项下方法平行制备，分别按“2.1”项下条件进行HPLC分析，进样量10 μL，结果测得芦丁峰面积RSD=1.9%，槲皮素峰面积RSD=1.5%，表明方法重复性良好。

2.7稳定性试验

取地肤子粉末，按“2.2.1”项下方法平行制备，按“2.1”项下条件分别于0、2、4、8、12、24 h进行HPLC分析，进样量10 μL，结果测得芦丁峰面积RSD=1.8%，槲皮素峰面积RSD=1.6%，表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验

按表2取样，进样量10 μL，记录峰面积，计算芦丁和槲皮素的加样回收率，结果见表2，结果符合含量测定要求。

表2 加样回收率试验

2.9 样品含量测定

精密称取不同产地和批号的地肤子样品粉末各2.0 g，进行HPLC分析，进样量10 μL，记录峰面积，计算芦丁和槲皮素含量。见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论

本研究考察了不同提取溶剂对地肤子中芦丁和槲皮素提取的影响，发现80%乙醇溶液具有最高的提取率。同时，优化了超声提取时间，发现30 min能将芦丁和槲皮素提取完全。200～300 nm之间色谱图中其他组分对芦丁和槲皮素的测定干扰严重；300～400 nm之间，370 nm的HPLC图谱无干扰，所以选择370 nm为检测波长。

中药及其复方制剂由于其作用机制复杂、有效成分不明确，常常对其一种化学成分进行检测难以有效控制其质量［12-14］。现代研究表明黄酮为中药中主要有效成分，黄酮类成分也是地肤子中的潜在主要药效成分［15-20］，对其中主要黄酮成分进行含量测定具有重要意义，本研究为地肤子质量标准深化提供科学依据。

［1］国家药典委员.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2015：123-124.

［2］Matsuda H，DaiY，IdoY，et a1.Studies on Kochiae Fructus III.Antinociceptive and Antiinf1ammatory Effects of 70% Ethano1 Extract and Its Component，Momordin Ic from Dried Fruits of Kochia Scoparia L［J］.Bio1ogica1 and Pharmaceutica1 Bu11etin，1997，20（10）：1086-1091.

［3］Matsuda H，Dai Y，Ido Y，et a1.Studies on Kochiae Fructus IV.anti-a11ergic effects of 70%ethano1 extract and its component，momordin Ic from dried fruits of KochiaScopariaL［J］.Bio1ogica1andPharmaceutica1Bu11etin，1997，20（11）：1165-1170.

［4］Shin KM，Kim YH，Park WS，et a1.Inhibition of Methano1 ExtractfromtheFruitsofKochiaScopariaon Lipopo1ysaccharide-InducedNitricOxide，Prostag1adin E2，and Tumor Necrosis Factor-.ALPHA.Production from Murine Macrophage RAW 264.7 Ce11s［J］.Bio1ogica1 and Pharmaceutica1 Bu11etin，2004，27（4）：538-543.

［5］Lu C，Zhang HY，Ji J，et a1.In vivo anthe1mintic activity of Dryopteris crassirhizoma，Kochia scoparia，and Po1yga1a tenuifo1ia against Dacty1ogyrus intermedius（Monogenea）in go1dfish（Carassius auratus）［J］.Parasito1ogy research，2012，110（3）：1085-1090.

［6］王建农，刘青云，姚春海，等.地肤子“杀虫止痒”外用功能规范研究［J］.中药材，2012，35（12）：1974-1977.

［7］吴春香，申万坤.地肤子醇提物止痒作用的实验研究［J］.中医药临床杂志，2009（5）：449.

［8］汪豪，范春林，王蓓，等.中药地肤子的三萜和皂苷成分研究［J］.中国天然药物，2003，1（3）：134-136.

［9］卢向红，徐向东，付红伟，等.地肤子化学成分的研究［J］.中国药学杂志，2012，47（5）：338-342.

［10］徐云辉，黄浩，郭兆霞，等.地肤子抗真菌化学成分研究［J］.中成药，2012，34（9）：1726-1729.［11］蒋剑平，沈小青，范海珠.地肤子化学成分及药理活性研究进展［J］.中华中医药学刊，2011，29（12）：2704-2706.

［12］肖作奇，欧阳波，潘涛，等.高效液相色谱法测定盆炎灵合剂中的阿魏酸，延胡索乙素，芍药苷，丹酚酸B及原儿茶醛含量［J］.中南药学，2014，12（12）：1225-1228.

［13］孟令锴，张朝立，高长久，等.高效液相色谱法同时测定百华花楸果实中金丝桃苷和芦丁的含量［J］.中国医药导报，2016，13（4）：32-35.

［14］乔立业，岩林苹，汪玥，等.高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量［J］.中国医药导报，2015，12（21）：4-7.

［15］周静，魏昕，曾艳，等.黄葵总黄酮对C-BSA肾炎模型大鼠的作用机理研究［J］.中药新药与临床药理，2015， 26（6）：759-764.

［16］刘星雨，周敏，孙体健.天然黄酮类化合物的药理活性及分离提取［J］.中国药物与临床，2014，14（5）：621-624.

［17］赵丹，苏宁，杨丽，等.蓝莓叶总黄酮的体外抗炎功效评价［J］.食品科学，2015，36（17）：231-235.

［18］刘国良，于英君，姚远，等.补骨脂二氢黄酮甲醚对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路的影响［J］.中国医药导报，2015，12（36）：4-8.

［19］张浩，易华，张欣，等.地肤子黄酮类提取物的抗氧化活性研究［J］.化工时刊，2012，26（7）：30-32.

［20］韩璐，赵成爱，马炳阳，等.地肤子水提液及大孔树脂分离物的抑菌作用［J］.吉林农业大学学报，2014，36（4）：442-446，453.

Simultaneous determination of rutin and quercetin in kochiae fructus by HPLC

XIAO ZuoqiWEN XiaokeOUYANG BoHUANG YiTIAN XiaPAN Tao
Department of Pharmacy，Hu′nan Provincia1 Materna1 and Chi1d Hea1th Care Hospita1，Hu′nan Province，Changsha 410008，China

Objective To estab1ish a method for simu1taneous determination of rutin and quercetin in kochiae fructus. Methods High performance 1iquid chromatography was performed on the co1umn of Agi1ent TC-C18co1umn with diode array detector.The mobi1e phase was acetonitri1e-0.2%phosphoric acid so1ution（gradient e1ution）.The compositions of quantitative ana1ysis were rutin and quercetin.Results The 1inear range of rutin and quercetin was 0.0017-0.0532 mg/mL and 0.0011-0.0340 mg/mL respective1y.The average recoveries were 98.5%and 97.88%with RSD of 1.57%and 1.87%respective1y.The average content of rutin and quercetin was 0.0592 mg/g and 0.0215 mg/g respective1y.Con鄄clusion This method is suitab1e for the content determination of rutin and quercetin in kochiae fructus with we11 stabi1ity and reproducibi1ity.

Kochiae fructus；HPLC；Content determination；Rutin；Quercetin

R914.1

A

1674-4721（2016）07（c）-0148-03

2016-04-08本文编辑：赵鲁枫）

湖南省中医药管理局科研项目（201671）。

肖作奇（1987.12-），男，博士，主要从事中药物质基础及质量控制研究。

文晓柯（1963.12-），男，硕士，主任药师；研究方向：中药研究与开发。