猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模

刘璨颖，徐卓菲，付 强

(1.佛山科学技术学院生命科学与工程技术学院，佛山 528000；2.华中农业大学动物科学与动物医学院，武汉 430070)



猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模

刘璨颖1，徐卓菲2，付 强1

(1.佛山科学技术学院生命科学与工程技术学院，佛山 528000；2.华中农业大学动物科学与动物医学院，武汉 430070)

旨在以猪链球菌(Streptococcussuis,S.suis)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)为药靶，给S.suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础。原核表达了S.suisHMGR，用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化，并用分光光度法测定了其酶活力。此外，运用CLUSTALW对同源HMGR氨基酸序列进行多序列比对。通过SWISS-MODEL对S.suisHMGR三维结构进行同源建模，并用PROCHECK评价模型的质量。酶活力测定结果显示，催化HMG-CoA还原为甲羟戊酸的反应中，S.suisHMGR最佳反应温度和pH分别为37 ℃和5.0，其Vmax和Km为846 U·mg-1和0.213 mmol·L-1。经分析显示，肺炎链球菌HMGR晶体结构(PDB ID：3QAE_A)是构建S.suisHMGR三维结构的最佳模板。构建的三维结构模型经质量评估证实为可靠的理论模型，将有助于虚拟筛选出对抗S.suis感染的新型抗生素，酶活力的测定为用试验手段验证S.suisHMGR抑制剂的有效性提供了可行性的方法。

链球菌；HMGR；原核表达；蛋白质纯化；酶活测定；同源建模

猪链球菌(Streptococcussuis,S.suis)是一种重要的人畜共患病原菌，能引起宿主广泛的临床疾病。猪感染S.suis后的临床症状包括脑膜炎、肺炎、败血症、心内膜炎、多发性浆膜炎、关节炎、流产和脓肿等[1-6]。S.suis甚至可以引起接触过感染猪或消费生猪产品的成人全身性感染[7]。由于针对S.suis感染没有合适的免疫接种措施，并且S.suis的耐药性日益增加，通过疫苗和抗生素治疗不能有效控制S.suis感染[8]。……