茉莉花叶多酚的抗氧化作用研究

商渊婷，周志鹏，李 原，甘家惠，黄锁义，黄上峰

(1.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000；3.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)



茉莉花叶多酚的抗氧化作用研究

商渊婷1，周志鹏1，李 原1，甘家惠1，黄锁义2，3*，黄上峰2，3

(1.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000；3.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)

目的：测定茉莉花叶乙酸乙酯提取物中多酚的含量及其体外抗氧化能力，为充分利用茉莉花资源提供理论依据。方法：用乙酸乙酯作溶剂，在75 ℃水浴中超声提取茉莉花叶多酚30 min，通过紫外-可见分光光度法测定了茉莉花叶中多酚的含量及其提取物的清除自由基能力。结果：茉莉花叶乙酸乙酯提取物中含有较高多酚含量，其提取物有较强的清除自由基能力，当提取物稀释10倍时，其抗氧化能力表现为：邻苯三酚法(89.2%)>Fenton法(77.0%)。茉莉花叶乙酸乙酯提取物的抗氧化能力随提取物浓度的增大而增加，二者呈现一定的量效关系。结论：茉莉花叶多酚具有较强的抗氧化活性。

茉莉花叶；多酚；抗氧化性

茉莉花，又称为茉莉，为木樨科素馨属(Jasminum)常绿灌木或藤本植物的统称。茉莉花在我国主要分布在广西、福建、江苏苏州,广西横县是我国茉莉花的主产地区,有“中国茉莉花都”之称。[1]茉莉花因其花朵洁白馨香，且花期较长，适合盆栽观赏或作插花之用，极具观赏价值。茉莉花不仅可供观赏，且有一定的药用价值。“人间第一香,茉莉止痛强”，止痛是它最为突出的一个功效。《本草纲目》记载，伤损之疾，用茉莉根“以酒磨一寸服，则昏迷一日乃醒……凡跌损骨节脱臼，接骨者用此，则不知痛也。”说明茉莉根有通脉止痛作用。传统中医药中,茉莉的花根叶均可入药,具有理气、开郁、辟秽、和中、治下痢腹痛、结膜炎、疮毒等功效[2]。茉莉花根具有治疗筋骨跌伤、关节炎 眼炎、腹痛、虚弱等症状。临床上，茉莉叶的水提液用于清洗眼睛，可治疗眼疾，东印度人还嚼茉莉叶来治疗口腔溃疡，把叶的汁涂在毒蛇咬的伤口上可治疗毒蛇咬伤；茉莉花可用于治疗痢疾、皮炎和肿瘤，痛茉莉花用菜油浸泡，滴人耳内可治耳心[3]。目前，中国茉莉花种植面积约为0.8万 hm2，年产鲜花约9万 t[4]。

本实验分别用Fenton法、DPPH法和邻苯三酚法对茉莉花叶乙酸乙酯提取物清除自由基能力进行了对比研究，旨在为保健医学和食品营养学等方面提供实验参考，同时为开发和利用茉莉花的药用价值提供理论依据。

1 实验部分

1.1 材料与试剂

1.1.1 仪器

UV-1800紫外分光光度计(日本岛津)、FA1004天子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)、KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、马头牌JYT-5架盘药物天平(上海医用激光仪器厂)、SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩仪市子华仪器有限责任公司)、722可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)。

1.1.2 试剂与药材

乙酸乙酯、水杨酸、盐酸、30%过氧化氢、硫酸亚铁、酒石酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)、邻苯三酚、DPPH等，所用试剂均为分析纯试剂，茉莉花叶采购自百色药店。

1.2 茉莉花叶乙酸乙酯提取液的制备

精确称取6g茉莉花叶粉末，加入乙酸乙酯，在75 ℃下水浴超声30 min，抽滤，然后将滤液转移至100 mL的容量瓶中，用乙酸乙酯定容到100 mL备用。再取上述溶液1 mL于10 mL的比色管中，加入一定体积的乙酸乙酯定容至刻度，然后测其吸光度。

1.3 酒石酸亚铁法测定多酚以及标准曲线绘制

取11支25mL的试管，标记序号，分别加入1 mg/mL的没食子酸溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.50 mL，再往每支试管中加入水4mL和刚配置好的酒石酸亚铁溶液5.0 mL，用缓冲液定容至25mL刻度，摇匀，静置1h后，在最大吸收波长为549 nm处以空白对照作参比，测其吸光度。以吸光度A为纵坐标，没食子酸浓度C(μg/mL)为横坐标绘出标准曲线并求出其回归方程为A=0.015 5C-0.071 2(R2=0.9982)。

1.4 样品中活性物质多酚含量的测定

分别移取一定体积稀释一定倍数的提取液，用上述方法测其吸光度，代入回归方程，求出浓度，按下列公式计算：

含量(μg/g)=浓度(μg/mL)×稀释倍数×提取液体积(mL)/(原料干重×106)×100%

尽量取多次提取液稀释后测其吸光度，求其平均含量。

1.5 抗氧化能力测定

表1为酒石酸亚铁法测定多酚以及标准曲线绘制结果，图1、图2、图3分别为不同稀释倍数茉莉花叶提取液对羟基自由基清除率、超氧自由基清除率、Fe3+还原能力的测定结果。

表1 722可见光分光光度计测多酚溶液吸光度

测得茉莉花叶中多酚的含量为7.05 μg/g。

1.5.1 Fenton法

本实验通过Fenton法测定茉莉花叶乙酸乙酯提取液的抗氧化能力,利用H2O2与Fe2+反应产生羟自由基(·OH)，基本反应如下：

H2O2+Fe2+→·OH+OH-+Fe3+

羟基自由基清除率的测定：取4支试管，往每支试管加入9 mmol/L FeSO41mL、9 mmol/L水杨酸-乙酸乙酯溶液2.0 mL，在其中3支试管中分别加入0.5、1.0、2.0mL的提取液，另一试管中2.0 mL蒸馏水作空白对照。最后往4支试管中加入8.89mmol/L H2O22mL开始反应，用乙酸乙酯定容至10 mL，静置1h。以蒸馏水作参比，于510 nm波长处测其吸光度，其计算其清除率：

式中：A0为空白对照液的吸光度；AS为加入提取液后的吸光度。

由图1可以看出，不同浓度的茉莉花叶提取液对H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生的·OH具有清除作用，并且在一定范围内，随提取液浓度的增加，·OH清除率有明显的上升趋势，说明茉莉花叶提取液对·OH的清除效果明显。

图1 不同稀释倍数茉莉花叶提取液羟自由基清除率

1.5.2 邻苯三酚法

超氧阴离子自由基清除率的测定：在4支试管中，分别加入2 mL新配置的pH值为8.43的缓冲溶液，在其中3支中分别加入0.5、1.0、2.0 mL的提取液，再往4支试管中分别加入1mL 0.2×10-3mol/L邻苯三酚溶液，用水定容至10 mL，在吸收波长为322 nm处每隔30 s记录一次吸光值，测量时间为4 min，每支试管测得8个吸光值，其清除率计算公式为：

图2 不同稀释倍数茉莉花叶提取液对超氧自由基清除率

1.5.3 普鲁士兰法

分别取不同浓度样品溶液2．5 mL，0．2 mol/L的磷酸缓冲液(PBS，pH值6．6)2．5 mL和1%六氰合铁酸钾溶液2．5 mL于具塞试管中，50 ℃水浴保温20 rain，快速冷却，再加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液2．5 mL，混合后以转速3 000 r/min离心10 min。取反应液2．5 mL，依次加入蒸馏水2．5 mL，0．1%三氯化铁溶液0．5 mL，充分混匀，静置10 min后，在波长700 nm下测定其吸光度，平行测定3次，吸光度越大表示还原力越强。

图3 不同稀释倍数茉莉花叶提取液对Fe3+还原能力

由图3可知，不同浓度的茉莉花叶提取液对Fe3+均具有还原能力，并且在一定的浓度范围内，随提取液浓度的增加，Fe3+的还原能力在增强，说明茉莉花叶提取液对Fe3+的还原能力效果较明显。

2 结 论

衰老是由自由基对细胞成分的有害进攻造成的[6]。因此，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的预防和治疗，而自由基清除剂的研究对人体健康的意义便显得更为重大。本实验以茉莉花叶作为原料，研究了其乙酸乙酯提取液抗氧化自由基作用，为开发和利用茉莉花的药用价值提供了理论依据。

[1] 黄芳芳,徐桂花,陈全斌.茉莉花研究文献计量分析[J].大众科技,2007(7):138-139.

[2] 栾海蓉,尹姣姣,莫韦皓，等. 茉莉花水提物对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制[J].中国药学杂志，2010,45(3)：182-186.

[3] 黄桂丽.茉莉的化学成分与药理作用的研究进展[J]．中外医疗，2010，29(33):113-114.

[4] 杨申勇．浅谈我国茉莉花茶的历史现状及发展措施[J]．茶叶通讯，2011，38(4)：32-34.

[5] 张昊，任发政.羟基和超氧自由基的检测研究进展[J].光谱学与光谱分析，2009,29(4)：1093-1099.

[6] 赵保路.自由基、营养、天然抗氧化剂与衰老[J].生物物理学报，2010，26(1):26-36.

Anti-oxidation Effect of Polyphenols from Jasmine Leaf

Shang Yuanting1, Zhou Zhipeng1, Li Yuan1, Gan Jiahui1, Huang Suoyi2,3*, Huang Shangfeng2,3

(1. School of Clinical Medicine，Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China； 2. School of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000,China；3. The Characteristics of Folk Medicine in Youjiang River in Guangxi Key Laboratory of Colleges and Universities, Baise 533000,China)

Objective：polyphenol content of ethyl acetate extract of Jasmine leaf and antioxidant capacity in vitro were determined, to provide a theoretical basis for the full use of the resources of jasmine. Method：Using ethyl acetate as the solvent in a water bath at 75 ℃ ultrasonic extraction jasmine leaf polyphenols 30min, by UV - visible spectrophotometry the free radical scavenging ability of jasmine leaf polyphenol content and extract. Results：The ethyl acetate extract of Jasmine leaves contain high content of polyphenols, the extract has a strong free radical scavenging capacity. When the extract was diluted 10-fold, its antioxidant capacity were as follows: pyrogallol method (89.2%) > Fenton France (77.0%).The ethyl acetate extract antioxidant capacity of Jasmine leaves increases with increasing extract concentration, showing a certain dose-effect relationship. Conclusion: Jasmine leaf polyphenol has a strong antioxidant activity.

Jasmine leaves; polyphenols; antioxidant

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.05.008

2016-03-11

国家自然科学基金资助项目(81160347)；国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科中药化学学科建设项目(国中医药人教发[2012]2号)；广西重点学科药物化学学科建设项目(桂教科研[2013]16号)；广西壮族自治区百色市科学研究与技术开发计划第一批项目(百科计1001013)。

商渊婷(1991—)，女，学士，主要研究方向：天然产物化学、药物化学、食品卫生。E-mail：476954662@qq.com

*通讯作者： 黄锁义，男，教授，硕士研究生导师。研究方向：天然产物化学、药物化学、食品卫生、中草药与植物化学。 E-mail：huangsuoyi@163.com

R284.2

A

1006-9690(2016)05-0032-03