神经胶质瘤细胞ATF5表达水平对HCMV复制的影响

张 雪， 钱冬萌， 胡 明， 陈 豪， 李 玲， 张 丽， 宋旭霞， 王 斌

(青岛大学医学院 病原生物学教研室，山东 青岛 266071)



神经胶质瘤细胞ATF5表达水平对HCMV复制的影响

张 雪， 钱冬萌， 胡 明， 陈 豪， 李 玲， 张 丽， 宋旭霞， 王 斌*

(青岛大学医学院 病原生物学教研室，山东 青岛 266071)

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV) 在神经胶质瘤细胞中的复制水平不一，其机制尚不清楚。本研究通过下调转录激活因子5(ATF5)在神经胶质瘤细胞中的表达，检测HCMV感染神经胶质瘤细胞后病毒复制水平的变化。首先用HCMV AD169 (MOI=5) 分别感染U87、SY5Y及A172细胞,观察细胞形态变化，分别在24、48、72、96、120 h取各时间点上清液检测病毒滴度；Real-time PCR检测HCMV即刻早期基因(IE2)、早期基因(UL44)、晚期基因(UL99)及ATF5的表达情况;Western-blot检测病毒基因编码蛋白及ATF5表达的情况。结果显示HCMV在U87、SY5Y细胞中复制水平与病毒在A172细胞中复制水平相比，U87、SY5Y细胞组明显高于A172细胞组(P<0.05)，ATF5表达在U87、SY5Y细胞组与A172细胞组相比，U87、SY5Y细胞组ATF5表达明显高于A172组(P<0.05)；利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调ATF5在U87、SY5Y细胞的表达，用HCMV感染细胞检测病毒基因及蛋白的表达，结果ATF5表达下调可抑制HCMV的复制(P<0.05)。以上结果表明，在胶质瘤细胞中下调ATF5表达水平可以抑制HCMV的复制水平。

人巨细胞病毒；转录激活因子5；复制；人胶质瘤细胞；病毒基因

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)属于β疱疹病毒亚科，是人类疱疹病毒中最大的一组病毒。在人群中，HCMV感染相当普遍，大多数感染呈临床隐性感染或潜伏感染；但在新生儿、免疫抑制或免疫功能低下的人群中则可引起临床显性感染，出现明显症状， 甚至发生致死性疾病。HCMV基因在宿主细胞内的转录、表达呈现一定时序性,即表达可分为即刻早期(immediately，early IE)、早期(early，E)和晚期(late，L)，IE基因编码产生的即刻早期蛋白可激活E基因编码的蛋白参与病毒复制，L基因编码蛋白参与病毒颗粒的结构组成[1]。HCMV感染和恶性神经胶质瘤关系密切，Cobbs等[2]对27例不同级别的胶质瘤组织(Ⅱ～Ⅳ级)、脑膜瘤组织、正常脑组织进行免疫组化检测，结果显示，胶质瘤均可检测到HCMV基因的表达，且随恶性程度增高而增高，而脑膜瘤组织、正常脑组织均未检测到HCMV基因的表达。……