微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

徐华林，赵娟娟，褚风云，郭萌萌，何志旭，陈 超，徐 林

(1.遵义医学院 免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室，贵州 遵义 563099；3. 贵州医科大学 组织工程与干细胞实验中心，贵州 贵阳 550004)



基础医学研究

微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

徐华林1,2，赵娟娟1，褚风云1，郭萌萌1，何志旭3，陈 超1，徐 林1,2

(1.遵义医学院 免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室，贵州 遵义 563099；3. 贵州医科大学 组织工程与干细胞实验中心，贵州 贵阳 550004)

目的 构建miR-7慢病毒过表达载体，并对人肺癌细胞进行感染，观察其影响效果。方法 设计引物，PCR法扩增miR-7初级序列；纯化、经BamHI和EcoRI双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体，并进行酶切及测序鉴定；将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7(命名为pLV-miR-7)载体体外转染293T细胞进行包装，在48 h收获上清，用Real-timePCR法测定该慢病毒滴度；将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后，用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平；CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果 菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA；同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功；慢病毒上清滴度为1.53×107copies/mL；该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体，并显著抑制细胞的体外生长(P<0.05)。结论 成功构建miR-7慢病毒过表达载体，为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。

miR-7；慢病毒载体；肺癌；CCK-8法；95D细胞株

微小RNA-7(microRNA-7，miR-7)是2001年由Mariana等[1]首次发现的miRNAs家族成员分子。近来研究显示，miR-7不仅参与包括肺癌在内的多种肿瘤细胞生长和侵袭的调控，且其在肿瘤组织中的异常表达与患者的预后及生存密切相关[2-6]。……