骨髓源性脂肪祖细胞培养及生物学特性研究

朱光旭，王金祥，周 芳，李自安，刘菊芬，阮光萍，白盈盈，潘兴华

骨髓源性脂肪祖细胞培养及生物学特性研究

朱光旭，王金祥，周 芳，李自安，刘菊芬，阮光萍，白盈盈，潘兴华

目的体外培养骨髓脂肪祖细胞（BMAPs），比较其与骨髓间充质干细胞（BMSCs）在形态、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相关基因表达方面的差异。方法无菌取1～2月龄雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓制作细胞悬液，EBM-2 (含20%FBS、15 μg/ml ECGs)培养基差速贴壁法培养第3次贴壁细胞，取传代至第3～5代细胞用于实验。流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45及CD90表达；STEMPROAdipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ（Ppaγ）、脂肪酸结合蛋白4（Fabp4）、脂蛋白脂肪酶（Lpl)、CCAAT/增强子结合蛋白α（Cebpa）、葡萄糖转运蛋白4（Slc2a4）及前脂肪细胞因子1（pread1）mRNA表达水平。结果传代接种培养24 h后，BMSCs形态上呈宽大、扁平状，而BMAPs大部呈长三角状；接种48 h后，BMSCs排列更为有序，而BMAPs多交织成网状。BMAP表达CD34、CD44、CD45及CD90，BMSC表达CD44及CD90，未检测到CD34和CD45表达。诱导培养后第4 d，BMAPs成脂率显著高于BMSCs（P＜0.01）；到第8 d，BMAPs成脂率为（87.2±11.67）%，BMSCs成脂率为（18.5±10.2）%，差异具有统计学意义（P＜0.01）。诱导分化后第4、8 d，Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4 mRNA在BMAPs表达水平均显著高于BMSCs（P＜0.01）。结论本实验获得了1种具有干细胞的生物学特性，高表达脂肪分化相关的特异性基因，可高效均质性地分化为脂肪细胞的BMAPs。

骨髓；脂肪祖细胞；间充质干细胞；脂肪细胞；分化

骨质疏松症患者往往伴随了骨髓肥胖，而骨髓脂肪细胞的生成造成的骨髓脂肪堆积是促进骨髓疏松症发病进程的关键[1]。骨髓间充质干细胞（BMSCs）可以向脂肪细胞分化，但其成脂肪分化能力并不一致。……