过继免疫联合化疗对晚期非小细胞肺癌的疗效及免疫功能的影响

胡振红 吴妍雯 刘海潮 张 波



过继免疫联合化疗对晚期非小细胞肺癌的疗效及免疫功能的影响

胡振红 吴妍雯 刘海潮 张 波

目的 探讨过继免疫联合化疗治疗非小细胞肺癌的疗效和对免疫功能的影响。方法选择NSCLC患者112例按治疗方式分为观察组和对照组。观察组42患者采用紫杉醇加奈达铂(TP方案)化疗，21 d为1个治疗周期，第1个周期治疗结束后10 d开始回输DC-CIK细胞，1次/d，输注4次为1个疗程，每次回输前给予苯海拉明20 mg肌注防止过敏反应的发生，然后再进行2个周期的化疗。对照组70例患者仅给予TP方案化疗3个周期。结果观察组患者DCR为66.7%，对照组患者DCR为52.9%，差异有统计学意义，P<0.05。观察组患者治疗后外周血CD3+、D8+、D56+细胞比值的升高有统计学意义，P<0.05，CD4+/CD8+的比值降低，与治疗前相比差异显著，P<0.05。对照组患者治疗后外周血CD3+、D8+、D56+细胞比值的降低有统计学意义，P<0.05，CD4+/CD8+的比值升高，与治疗前相比差异显著，P<0.05。观察组患者治疗后外周血IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平升高显著，P<0.05。对照组患者治疗后外周血IL-12、IFN-γ和TNF-α降低显著，P<0.05。结论过继免疫治疗联合化疗治疗NSCLC，可提高患者的疾病控制率，改善患者的免疫功能。

过继免疫；树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；非小细胞肺癌；免疫功能

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1466～1469)

肺癌是常见的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的发病率居肺癌之首，占肺癌的80%左右[1]。随着分子生物学及肿瘤免疫研究的进展，肿瘤的免疫疗法已成为继传统手术、放射治疗和化疗后的第4种治疗手段[2]。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytoking induced killer，CIK)过继免疫是新一代过继免疫治疗的首选方案，其具有杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感的优点。CIK细胞免疫疗法对于各种放化疗间歇期的肿瘤患者，树突状细胞(dendritic cell，DC)-CIK不仅能缓解患者的病情，同时也有益于患者免疫力的提高。本科室自2010年5月至2013年5月采用自体外周血单核细胞培养的DC-CIK过继免疫联合化疗治疗42例NSCLC患者，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2010年5月至2013年5月收治的NSCLC患者112例，将采用DC-CIK联合化疗治疗的42例患者纳入观察组，将单纯采用化疗治疗的70患者纳入对照组。观察组男性26例，女性16例；年龄32～78岁，平均(46.9±15.7)岁。对照组男性42例，女性28例；年龄22～80岁，平均(45.6±14.3)岁。所有患者均经病理学或细胞学诊断为Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者，未进行放化疗治疗，排除严重心、肝、肾疾病患者，排除依从性差，不能配合试验的患者。所有入选患者或家属签署知情同意书，报医学伦理委员会批准。

1.2 方法

DC细胞培养：患者经造血动员后抽取外周血150～200 ml，常规分离收集单个核细胞。分析后的单个核细胞用pH的PBS溶液洗涤3次，用RPMI 1640完全培养基将细胞配置成2×109/L的细胞悬浮液，加入6孔板培养板中置37 ℃、5%CO2培养箱中培养2 h。弃上清液，用预热的培养基清洗2次，获得贴壁的单核细胞。向每孔加入3 ml完全培养液(100 mg/ml rhGM-CSF、50 ng/ml rhIL-4)诱导DC，每2 d半量更换完全培养液，第5 d加入终浓度为10 ng/ml的IL-1β、10 μg/ml的PEG-2和20 ng/ml的TNF-α，置培养箱中继续培养48 h获得成熟DC。

CIK细胞制备：获得贴壁单核细胞同DC细胞培养。向每个细胞培养孔中加入3 ml RPMI1640培养基、1 000 U/ml IFN-γ、50 ng/ml anti-CD3单克隆抗体和1 000 U/ml IL-2诱导CIK，第7 d将DC和CIK按1∶10混合培养7 d产生DC-CIK，经细菌和霉菌培养阴性后收集细胞。收集后的细胞经生理盐水洗涤3次后配成150 ml细胞悬浮液，静脉回输，1次/d，5 d一个疗程，每个疗程回输细胞总数5～6×109个。

治疗方法：观察组患者采用紫杉醇加奈达铂(TP方案)化疗，21 d为1个治疗周期，第1个周期治疗结束后10 d开始回输DC-CIK细胞，1次/d，输注4次为1个疗程，每次回输前给予苯海拉明20 mg肌注防止过敏反应的发生，然后再进行2个周期的化疗。对照组患者仅采用TP方案化疗3个周期。

1.3 观察指标

两组患者在治疗前和治疗后进行T细胞亚群检测，包括CD3+、CD4+、CD8+及CD56+，同时检测细胞因子，包括IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α。两组患者治疗结束后4周行影响学检查对肿瘤治疗效果进行评价，分为完全缓解(complete remission，CR)、部分缓解(partial remission，PR)、疾病稳定(stable disease，SD)和疾病进展(progression disease，PD)。疾病控制率(disease control rate，DCR)=(CR+PR+SD)/(CR+PR+SD+PD)，有效率(response rate，RR)=(CR+PR)/(CR+PR+SD+PD)。观察并记录两组患者的不良反应。按照《肺癌患者生活质量评估测量表》评估两组患者治疗后的生活质量。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0进行统计分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者疗效对比

观察组中CR 1例，PR 20例，SD 7例，PD 14例，DCR为66.7%，RR为50.0%，对照组中CR 0例，PR 26例，SD 11例，PD 33例，DCR为52.9%，RR为37.1%。两组患者PD率和DCR差异有统计学意义，P<0.05，其他指标比较差异无统计学意义，P>0.05，见表1。

2.2 两组患者治疗前后T细胞亚群检测结果对比

观察组患者治疗后外周血CD3+、CD4+、D8+、D56+T细胞所占比值均有所升高，其中CD3+、D8+、D56+细胞比值的升高有统计学意义，P<0.05，CD4+/CD8+的比值降低，与治疗前相比差异显著，P<0.05；对照组患者治疗后外周血CD3+、CD4+、D8+、D56+T细胞所占比值均有所降低，其中CD3+、D8+、D56+细胞比值的降低有统计学意义，P<0.05，CD4+/CD8+的比值升高，与治疗前相比差异显著，P<0.05，见表2。

表1 两组患者疗效对比(例，%)

表2 两组患者治疗前后T细胞亚群检测结果对比(±s，%)

表2 两组患者治疗前后T细胞亚群检测结果对比(±s，%)

项目治疗前治疗后tP观察组CD3+52．1±9．759．6±10．36．3250．002CD4+32．2±8．933．3±9．22．1300．241CD8+20．9±8．727．4±4．88．6200．000CD56+18．4±5．222．6±5．15．6490．008CD4+/CD8+1．3±0．21．1±0．23．9850．035对照组CD3+52．3±8．544．9±9．24．1290．021CD4+32．0±8．729．0±8．51．8540．369CD8+21．6±9．619．8±6．56．6680．001CD56+20．9±5．718．0±4．33．4670．045CD4+/CD8+1．3±0．21．4±0．14．2630．017

2.3 两组患者治疗前后外周血细胞因子的变化

观察组患者治疗后外周血IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平均升高，以IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平升高显著，P<0.05。对照组患者治疗后外周血IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平降低，其中以IL-12、IFN-γ和TNF-α降低显著，P<0.05。

表3 两组患者治疗前后外周血细胞因子的变化(pg/mg，±s)

表3 两组患者治疗前后外周血细胞因子的变化(pg/mg，±s)

项目治疗前治疗后tP观察组IL-21．9±0．52．1±0．44．6250．012IL-101．9±0．41．8±0．41．0010．523IL-122．0±0．52．2±0．53．6200．042INF-γ1．8±0．42．0±0．56．6460．002TNF-α1．8±0．52．1±0．58．9850．000对照组IL-22．0±0．41．9±0．42．0200．265IL-102．0±0．42．0±0．51．8540．369IL-122．1±0．51．8±0．53．6680．040INF-γ1．9±0．61．7±0．54．6370．011TNF-α1．9±0．51．8±0．34．0100．019

2.4 两组患者不良反应对比

两组患者主要不良反应为胃肠道反应和轻度骨髓抑制，消化道反应主要表现在纳差、恶心、呕吐等，观察组患者消化道反应发生率为76.2%(32/42)，对照组为70.0%(49/70)。骨髓抑制主要表现在白细胞Ⅰ～Ⅱ度减少，观察组患者骨髓抑制发生率为66.7%(28/42)，对照组为57.1%(40/70)。两组不良反应发生率无显著性差异，P<0.05，经对症治疗均有不同程度缓解。

3 讨论

肿瘤的发生、发展与机体免疫功能息息相关。肺癌患者的免疫功能低下，严重可能会出现细胞免疫功能下降，体液免疫功能增强，严重干扰机体的抗肿瘤免疫[3]，而且手术、放化疗等治疗手段会进一步削弱患者免疫力，致使患者不能很好的完成治疗疗程，尤其是老年晚期患者。在不损伤患者免疫力的基础上又能起到治疗肿瘤作用的治疗方法对患者来说尤为重要。随着肿瘤免疫治疗的发展，过继免疫治疗已成为继手术、放化疗之后肿瘤治疗的重要辅助手段。过继免疫治疗是1种被动免疫治疗方法，可以重建患者的免疫系统，能高效清除微小病变，为预防肿瘤复发和提高患者的生存质量提供有利条件。常见的细胞免疫治疗方式有DC、CIK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞、DC-CIK细胞等。本研究采用自体外周血单核细胞培养的DC-CIK用于过继免疫治疗NSCLC患者。

DC广泛分布于脑以为的各组织器官[4]，细胞免疫功能强大，在免疫应答中处于重要地位，可引发机体启动免疫应答[5]，还可通过调控B细胞的增值从而启动体液免疫应答[6]。CIK是1种细胞毒性T细胞，有IFN-γ、CD3和IL-2等细胞因子诱导形成，具有增值迅速、杀肿瘤活性强等特点[7]。实验表明DC与CIK共培养后CIK细胞的增值和抗肿瘤活性明显提高[8]。

大量研究证明DC-CIK在肿瘤的治疗中取得了良好的效果，可以显著改善患者的免疫功能和临床症状，延长患者的生存期[9-11]。蔡俊霞等[12]采用DC-CIK过继免疫治疗43例NSCLC患者，结果显示治疗后患者CD3+、CD4+、CD56+等T效应细胞均显著增加，同时IL-2、IL-12、IFN-γ等细胞因子水平也显著升高，可见DC-CIK用于治疗NSCLC 患者可以显著提高患者免疫力。张曼等[13]联合DCs-CIK细胞免疫治疗和化疗治疗136 NSCLC患者，结果显示相比于单纯化疗组，联合治疗组患者外周血中CD3+、CD8+和自然杀伤细胞比例明显升高，同时患者生活治疗也明显提高，可见DCs-CIK细胞免疫治疗联合化疗可改善晚期NSCLC患者的免疫功能和生活质量。本研究中过继免疫治疗联合化疗的患者疾病控制率明显高于单纯化疗的患者，主要表现在疾病进展率较低，可见过继免疫治疗的患疾病稳定，可能过继免疫能消除微小病变预防肿瘤复发的特点有关。而且本组患者中联合治疗的患者外周血中CD3+、CD4+、D8+、D56+T细胞所占比值均有所升高，同时IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平也出现升高，可见患者的免疫功能也得到改善，抵抗肿瘤的能力增强，也在一定程度上减慢了疾病的进程。有研究显示IL-2、IFN-γ和TNF-α能增强NK细胞的活性，能直接杀伤肿瘤细胞同时又能抑制肿瘤细胞的增值，减少肿瘤的转移[14]，另外，IL-12与肿瘤的进展关系密切，在出现肿瘤进展的患者外周血中IL-12明显降低[15]。

综上所述，过继免疫治疗联合化疗治疗NSCLC提高患者的疾病控制率，改善患者的免疫功能，不增加患者的不良反应发生率，具有较好的安全性和有效性。

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(编辑：吴小红)

Curative Effect of Adoptive Immunotherapy Combined with Chemotherapy for Advanced Non-small Cell Lung Cancer and Its Effect on Immune Function

HUZhenhong,WUYanwen,LIUHaichao,etal.WuhanGeneralHospitaofGuangzhouMilitaryRegion,Wuhan,430070

Objective To investigate the clinical efficacy of adoptive immunotherapy combined with chemotherapy for advanced non-small cell lung cancer and its effect on immune function.Methods 112 cases of NSCLC were divided into the observation group and the control group according to the treatment method.In the observation group,42 patients were treated with paclitaxel and nedaplatin (TP Regimen) chemotherapy,21 days for one period of treatment,10 days after the end of the first cycle of treatment,DC -CIK cells reinfusion started,1 times/D,4 times for a period of treatment.Before each transfusion,20 mg intramuscular injection of diphenhydramine hydrochloride was given to prevent the occurrence of allergic reactions,and 2 cycles of chemotherapy were performed.In the control group,70 patients were only treated with TP chemotherapy for 3 cycles.Results DCR was 66.7% in the observation group and 52.9% in the control group,the difference was statistically significant,P<0.05. CD3+,D56+ and D8+ cells in the peripheral blood of the observation group significantly increased after treatment,P<0.05. CD4+/CD8+ decreased significantly compared with before treatment,P<0.05. CD3+,D8+,D56+cells in the peripheral blood significantly decreased in the control group,and CD4+/CD8+ significantly increased,P<0.05.The levels of IL-2,IL-12,IFN-γand TNF-αwere significantly higher in the observation group after treatment,P<0.05.The levels of IL-12,IFN-γand TNF-α were significantly lower in the control group after treatment,P<0.05.Conclusion Adoptive immunotherapy combined with chemotherapy in the treatment of non-small cell lung cancer can improve disease control rate and immune function of patients.

Doptive immunotherapy；Dendritic cell(DC);Cytokine induced killer cell(CIK);Non-small cell lung cancer;Immune function

430070 广州军区武汉总医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.09.024

R734.2

A

1001-5930(2016)09-1466-04

2015-11-04

2016-04-25)