绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达

刘 伟，王 杰，幸永明，赵 宏，龚德军

(1.解放军第113医院 骨科，浙江 宁波 315040； 2.第二军医大学附属长海医院 胸心外科实验室，上海 200433)

绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达

刘 伟1，王 杰1，幸永明1，赵 宏1，龚德军2

(1.解放军第113医院 骨科，浙江 宁波 315040； 2.第二军医大学附属长海医院 胸心外科实验室，上海 200433)

目的 构建绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体，转染兔骨髓间充质干细胞，观察SOX9基因的表达情况。方法 双酶切从GeneArt提供的含SOX9基因序列的质粒13ABIV6C_1366933并克隆到pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP载体，获得含SOX9基因的质粒pLMIG-13GS0345-1，通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体(Lenti-SOX9-GFP)，将Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后观察SOX9基因的表达情况。结果 测序结果显示质粒pLMIG-13GS0345-1中的插入序列与基因库中SOX9(NM_000346)基因序列完全一致，成功构建Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体。Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后可观察到绿色荧光蛋白的表达，RT-PCR与Western Blot检测结果证明Lenti-SOX9-GFP转染目的细胞后可在mRNA及蛋白水平成功表达SOX9。结论 本实验成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带SOX9基因的Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体，并在兔骨髓间充质干细胞中成功表达，为下一步研究提供前期实验基础。

慢病毒载体；骨髓间充质干细胞；椎间盘；SOX9基因；绿色荧光蛋白

(ChinJLabDiagn,2017,21:0140)

已有许多研究证实调节II型胶原合成的Sox-9基因 (sex determining region Y-Box9，Sox-9)在髓核退变中发挥重要的作用，SOX9基因可能参与了椎间盘从发育、成熟到退变的整个变化过程，增加SOX9可以明显增加II型胶原的合成，从而可能达到对退变椎间盘的修复作用[1,2]。目前采用基因转染技术加强或改造种子细胞是当今组织工程研究中热点[3]，通过基因转染可以达到较为长期、高效、局部的效果，避免了直接应用生长因子时可能发生的过量反应和全身性毒副作用。……