纤维蛋白胶介导大鼠内皮祖细胞移植干预大鼠急性脑缺血的实验研究

权 哲，宋 薇，韦 博，胡国章

(1.上海市奉贤区中心医院 神经二科，上海201400；吉林大学中日联谊医院 2.急诊科；3.神经外二科)

纤维蛋白胶介导大鼠内皮祖细胞移植干预大鼠急性脑缺血的实验研究

权 哲1，宋 薇2*，韦 博3，胡国章2

(1.上海市奉贤区中心医院 神经二科，上海201400；吉林大学中日联谊医院 2.急诊科；3.神经外二科)

1 材料和方法

1.1 实验材料

冰箱(Hisense)，超净工作台(苏州净化)，CO2恒温培养箱(Thermo Scientific)，荧光倒置显微镜(OLYMPUS) ，电热恒温干燥箱(常州润华仪器)，超纯水纯化仪(四川优普科技)，高压蒸汽灭菌锅(山东博科)，动物大脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)。M199培养基(Life公司)，胎牛血清(BI)，大鼠淋巴细胞分离液(上海生工生物)，纤维蛋白胶(sigma公司)，CD34/CD133荧光标记的抗体(BD公司)，VEGF/FGF-2单克隆抗体(Bioworld公司)。

1.2 大鼠骨髓 EPCs的分离、培养和鉴定

将健康 Wistar 大鼠用乙醚麻醉后脱臼处死，75%酒精中浸泡5 min，超净台内剥离肌肉并离断两端骨骺，预冷PBS润洗，加入淋巴细胞分离液离心后收集沉淀，用M199培养基重悬细胞，计数后接种到24孔板中，置于恒温培养箱培养。CD34/CD133阳性的细胞通过免疫荧光鉴定获得。

1.3 内皮祖细胞与纤维蛋白胶形成复合物

将适量的CD34/CD133阳性内皮祖细胞用内皮细胞培养基重悬后，种植在纤维蛋白胶表面，定期更换新的培养基，置于37 ℃、5%CO2培养箱中，大约经过7 d后形成载有内皮祖细胞的纤维蛋白胶复合物。

1.4 大鼠急性脑卒中模型的建立

式中：Eb为泵站运行费用，元/m3；W 为泵站装机功率，kW；F为农业供水电价，元/（kW·h）；Q 为泵站设计流量，m3/h；η末为泵站出口 （一级计量点）至终端计量点之间的渠系水利用系数，示范区中为斗渠渠道水利用系数。……