芍药内酯苷和芍药苷对慢性束缚应激大鼠神经营养因子以及一氧化氮影响的研究

朱映黎++王林元　王成龙　赵丹萍　王莎　费文婷　张建军

[摘要] 研究芍药内酯苷、芍药苷对慢性束缚应激肝郁大鼠的作用及机制。以氟西汀及逍遥丸为对照，检测体重，糖水消耗量，并进行旷场行为学实验；格瑞斯比色法检测海马一氧化氮（NO）的含量；酶免法（ELISA）检测海马脑源性神经营养因子（BDNF）的含量；RTqPCR法检测海马神经元一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达；Western blot法检测海马中nNOS以及BDNF的蛋白表达。与模型组相比，30 mg·kg-1芍药苷、30 mg·kg-1芍药内酯苷明显升高穿行次数（P<0.05；P<0.01）；芍药苷、芍药内酯苷明显降低NO水平（P<0.05，P<0.01；P<0.05，P<0.05）；30 mg·kg-1芍药苷与30 mg·kg-1芍药内酯苷明显升高BDNF水平（P<0.05）。与模型组相比，芍药苷、芍药内酯苷明显降低nNOS mRNA表达（P<0.01；P<0.05）；30 mg·kg-1芍药苷、30 mg·kg-1芍药内酯苷明显升高BDNF 蛋白表达（P<0.05）。芍药内酯苷、芍药苷为白芍柔肝解郁功效的有效成分，其作用机制与调节海马NO含量以及BDNF的表达有关。

[关键词] 芍药内酯苷； 芍药苷； 肝郁证； 一氧化氮； 脑源性神经营养因子

Investigation of effects of albiflorin and paeoniflorin on hippocampal BDNF and NO in chronic restraint stress rats

ZHU Yingli， WANG Linyuan， WANG Chenglong， ZHAO Danping， WANG Sha， FEI Wenting， ZHANG Jianjun*

（Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

[Abstract] This paper aimed to investigate the antidepressantlike effects and the mechanism of the albiflorin， paeoniflorin on rats with chronic restraint stress model. Fluoxetine and Xiaoyao group served as the positive control， body weight， sucrose preference test and the open field behavioral experiment were measured， the levels of nitric oxide （NO） in hippocampus were detected by Greg colorimetric method. Furthermore， the levels of brain derived neurotrophic factor （BDNF） in hippocampus were detected by ELISA. Finally， the expressions of nNOS mRNA in hippocampus detected by RTqPCR， the protein levels of nNOS and BDNF in hippocampus were detected by Western blot. Compared with the model group，the pass counts of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05，P<0.01）. Furthermore， compared with the model group，the levels of NO in paeoniflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） and albiflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） were all significantly decreased（P<0.05，P<0.01； P<0.05， P<0.05）. BDNF levels of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05）. Finally， compared with the model group， the expressions of nNOS mRNA of paeoniflorin groups（30 mg·kg-1 and 15 mg·kg-1） （P<0.01， P<0.01） and albiflorin groups（30 mg·kg-1） were significantly decreased（P<0.05）. Compared with the model group， the protein exprsssions of BDNF of paeoniflorin group（30 mg·kg-1） and albiflorin group（30 mg·kg-1） were obviously increased（P<0.05）. Albiflorin and paeoniflorin have the effects of smooth the liver and dispel stagnation， the mechanism has the relevant with adjusting and controlling the expression of NO and BDNF in hippocampus.

[Key words] albiflorin； paeoniflorin； liver stagnation syndrome； nitric oxide； brain derived neurotrophic factor

doi：10.4268/cjcmm20162225

白芍[1]为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，味苦、酸，微寒，归肝、脾经，养血敛阴，柔肝止痛。赤芍[1]为毛茛科植物芍药P. lactiflora Pall.或川赤芍P. veitchii Lynch的干燥根，味苦、微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛。白芍与赤芍来源相似，都含有芍药苷、芍药内酯苷等单萜苷类成分[2]，研究表明芍药内酯苷、芍药苷具有补血、抗应激作用[39]。本实验通过芍药内酯苷和芍药苷对束缚应激致肝郁大鼠药理作用以及对海马脑源性神经营养因子（BDNF）以及NO的研究，探讨白芍特征成分芍药内酯苷与赤芍与白芍的共同有效成分芍药苷的作用机制及特点。

1 材料

1.1 动物 雄性Sprague Dawley大鼠，体重（180±20） g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，合格证号SCXK（京）20160002。

1.2 药品 实验用芍药内酯苷、芍药苷均为自制，纯度均高于96%。氟西汀购自PATHEON FRANCE，产品批号5169A（分包装厂礼来苏州制药有限公司，分包装批号5169AA）。逍遥丸（浓缩丸）购自九芝堂股份有限公司，产品批号201510006，经本实验室HPLC测定，本品芍药苷质量分数为4.19 mg·g-1，芍药内酯苷质量分数为2.68 mg·g-1。……