初治结核病患者自噬相关基因表达水平的研究

吕子征 王伟 刘京铭 李传友 高孟秋

·论著·

初治结核病患者自噬相关基因表达水平的研究

吕子征 王伟 刘京铭 李传友 高孟秋

目的 研究初治结核病患者自噬相关基因表达水平。方法 选取2013年12月至2016年3月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的12例初治肺结核病患者作为病例组；选取首都医科大学附属北京胸科医院体检健康的新入职职工和在读学生12名作为对照组。收集研究对象外周血，提取RNA，将RNA逆转录为cDNA，进行实时定量PCR。使用H37Rv标准株感染人外周血单核细胞(THP-1细胞)作为感染组，而未感染H37Rv标准株的THP-1细胞作为未感染组，分别在感染4 h和6 h使用Trizol法提取RNA，将RNA逆转录为cDNA，进行实时定量PCR检测。实时定量PCR检测使用β-肌动蛋白(β-actin)作为内参基因，测量各个基因的循环阈值(cycle threshold，Ct)，并计算各个基因的ΔCt值。不同样品同一基因的检测通过计算两者之间的ΔCt值差值，使用2-ΔΔCt比较基因之间的表达水平。结果 病例组Ras蛋白脑组织同源类似物(Rheb)基因ΔCt值为8.71±0.58，对照组ΔCt值为7.83±0.58，两组相比差异有统计学意义(t=3.74，P=0.001)；病例组Rheb基因表达下调。病例组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因ΔCt值为11.88±0.97，对照组ΔCt值为10.81±1.04，两组相比差异有统计学意义(t=2.60，P=0.016)；病例组mTOR基因表达下调。使用2-ΔΔCt法比较两组间自噬相关基因表达倍数关系，对照组Rheb基因表达水平是病例组的(1.85±0.91)倍；对照组mTOR基因表达水平是病例组的(2.76±1.56)倍。H37Rv标准株感染THP-1细胞6 h后，感染组自噬相关蛋白LC3B基因ΔCt值为6.41±0.15，未感染组ΔCt值为7.04±0.05，两组相比差异有统计学意义(t=4.50，P=0.046)；感染组表达上调。感染组mTOR基因ΔCt值为8.73±0.16，对照组ΔCt值为10.10±0.20，两组相比差异有统计学意义(t=4.79，P=0.041)，感染组表达上调。……