大蒜素对酒精损伤神经干细胞的保护作用研究

张 莹

（山东济宁医学院附属医院，山东 济宁 272000）

・实验研究・

大蒜素对酒精损伤神经干细胞的保护作用研究

张 莹

（山东济宁医学院附属医院，山东 济宁 272000）

胎儿酒精综合征是指胎儿或新生儿由于母亲在孕期或哺乳期过量饮酒而产生的大脑发育不良及其他畸形。已有研究证实胎儿酒精综合征是由于酒精对于多种神经细胞，尤其是神经干细胞的损伤作用导致的。本研究首先成功建立了体外贴壁培养神经干细胞的方法，然后又MTT比色法检测证实了大蒜素可以减轻酒精对于神经干细胞生长增殖的抑制作用。本研究揭示了阻止酒精损伤神经干细胞的一个新方法，为胎儿酒精综合征的预防与临床治疗提供了一个新的途径。

大蒜素；酒精损伤神经干细胞；研究

胎儿酒精综合征（Fetal Alcohol Syndrome，FAS）是指胎儿或新生儿由于母亲在孕期或哺乳期过量饮酒而产生的大脑发育不良及其他畸形。已有研究证实FAS是由于酒精对于多种神经细胞，尤其是神经干细胞（Neuronal Stem Cell，NSC）的损伤作用导致的。酒精可以通过抑制NSC的生长增殖，乃至导致NSC凋亡，最终抑制神经系统的发育，导致大脑发育畸形。

本研究通过对体外贴壁培养的NSC的深入研究发现，大蒜素对于酒精导致的NSC的生长抑制具有明显的缓解作用。本研究揭示了阻止酒精损伤NSC的一个新方法，为FAS的预防与临床治疗提供了一个新的途径。

1 材料与方法

1.1 材料

SD大鼠（由北京维通利华公司提供）；Neurobasal培养基，B27，GlutMAX（购自Gibco公司）；bFGF，EGF（购自PeproTech公司）；大蒜素（购自上海禾丰制药有限公司）；Nestin抗体（购自武汉博士德生物工程有限公司）；MTT（购自Sigma公司）；Multiskana A scent酶标仪（Thermo公司产品）。

1.2 方法

1.2.1 NSC的贴壁培养与鉴定

无菌条件下从孕13.5天的大鼠腹中取出胎鼠，解剖显微镜下取出胎鼠的端脑组织。经胰酶消化后，机械吹打并经血细胞计数板计数后获得单细胞悬液。将之接种于含2% B27，10 ng/μl EGF，10 ng/μl bFGF的Neurobasal培养液中。培养瓶/皿需经0.1%多聚赖氨酸处理1 h并经无菌蒸馏水洗涤后，方可使用。细胞于37度，5% CO2和饱和湿度的条件下进行培养。3天换半液，6天即可用于免疫荧光鉴定或MTT实验。

1.2.2 实验分组

本实验分为正常对照组、损伤组（100 mmol酒精）、保护组（100 mmol酒精+10 μg/ml大蒜素）共三组。

1.2.3 MTT比色法检测NSC的生长增殖情况

接种于96孔板的NSC培养6天后，正常对照组不作处理，而2个实验组则加入相应的溶液进行处理，每组设6个复孔。37度孵育20 h后，每孔加入新鲜配制的MTT（5 mg/ml），继续培养4 h。吸弃培养液并加入150 μl/孔的DMSO，持续震荡5 min。将晶体已充分溶解的96孔板置于酶标仪中，测量570 nm时各孔的OD值。

2 实验结果

2.1 NSC的体外贴壁培养与鉴定

NSC在正常贴壁培养6天以后，展现出显著的集落样的结构，说明在此培养条件下NSC具有良好的增殖能力。我们免疫细胞化学染色的结果发现Nestin阳性细胞率可达90%以上，证实我们成功培养了贴壁生长的NSC。

2.2 MTT比色法证实大蒜素对酒精损伤NSC的保护作用

进一步的，MTT比色测定结果发现，正常NSCs的存活率（OD值）为0.41±0.02，而酒精处理后，该存活率（OD值）降低至0.15±0.02。更重要的是，大蒜素+酒精组的细胞存活率（OD值）升至0.27±0.04。上述结果证实大蒜素可显著减少酒精损伤导致的NSC存活率下降。该结果证明了大蒜素对于酒精损伤NSC具有显著的保护作用。

3 讨 论

NSC是神经系统各种细胞的前体细胞，其可以通过自我复制的形式进行自我更新以及数量的维持。另外，在适当的时候，NSC还可以定向分化为适当类型的神经细胞，对于大脑正常的程序化发育具有关键的作用。NSC生长增殖的紊乱，将直接导致神经系统发育缺陷。体内外的研究已证实酒精可以抑制NSC的增殖并导致其死亡，这被认为是FAS的发病原因之一。寻找一个可以保护NSC免受酒精损伤的药物，将对FAS的预防和治疗发挥积极作用。本研究发现大蒜素对于酒精造成的NSC损伤具有显著的保护作用。这一发现，提示孕期或哺乳期的妇女适当服食大蒜不仅可以起到杀菌消毒，防癌治癌的作用，而且还可以预防和治疗FAS。这一发现为FAS的预防与治疗提供了一个新的角度，将对提高我国的人口质量提供一定的帮助。

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ISSN.2095-8242.2017.057.11099.02

本文编辑：吴 卫