小鼠巨噬细胞系RAW 264.7向破骨细胞分化的诱导条件

耿 欢，林 琛，邢更彦

小鼠巨噬细胞系RAW 264.7向破骨细胞分化的诱导条件

耿 欢，林 琛，邢更彦

目的探讨RAW 264.7细胞与向破骨细胞分化的诱导条件，以期提高破骨细胞的数量与活性。方法 采用不同浓度核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor κB ligand，RANKL）诱导RAW 264.7细胞4 d后形成破骨细胞，并通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色和鬼笔环肽染色鉴定破骨细胞，骨板吸收实验检测破骨细胞的骨吸收活性，反转录酶-聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测破骨细胞功能基因TRAP、破骨细胞相关受体（osteoclast-associated receptor，OSCAR）、c-Fos、核转录因子激活的T细胞1（nuclear factor of activated T-cells 1，NFATc1）的表达。结果RAW 264.7细胞经RANKL诱导4 d后可出现大量TRAP呈阳性和纤维肌动蛋白环形成的多核破骨细胞，骨板上形成较多的骨吸收瘢痕，RT-PCR检测到破骨细胞特殊功能基因信使核糖核酸（message ribonucleic acid，mRNA）高表达。结论RAW 264.7诱导4 d可产生大量噬骨能力较强的破骨细胞。

RAW 264.7；破骨细胞；抗酒石酸酸性磷酸酶；核因子κB受体活化因子配体

骨的生理平衡是通过成骨细胞的骨形成与破骨细胞的骨吸收维持的[1]。破骨细胞的过度激活与功能增强会打破这种平衡，导致骨量减少，增加骨折的风险，如类风湿性关节炎、多发性骨髓瘤等疾病，因此破骨细胞的研究非常重要与有意义。破骨细胞的获取是研究的前提，但其在骨组织中含量少，较难分离，体外诱导是获取破骨细胞的主要方法。破骨细胞是在骨组织中由单核巨噬细胞分化来的特殊的具有吞噬骨组织功能的多核巨细胞。由于成骨细胞与破骨细胞之间OPG/ RANKL/RANK信号轴的发现[2]，使在体外诱导单核巨噬细胞融合成破骨细胞成为简单有效的方法。……