地稔总黄酮含量的测定

杨菁 朱丹 杜雨涵 陈华巧 于妮

摘要[目的]建立地稔中总黄酮含量的测定方法。[方法]采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂，检测波长为500 nm，测定地稔中总黄酮含量。[结果]芦丁浓度在0.01～0.07 mg/mL时与吸光度呈良好的线性关系（R2=0.999 8）；平均加样回收率为99.34%，相对标准偏差为0.56%。[结论]该方法简单可靠、精密度高、重现性好，为地稔的进一步开发利用提供了理论依据。

关键词地稔；总黄酮；紫外-可见分光光度法

中图分类号R284文献标识码

A文章编号0517-6611（2017）16-0009-02

Determination of Total Flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.

YANG Jing，ZHU Dan，DU Yuhan et al（Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550031）

Abstract[Objective] To establish a method for the total flavonoids content determination from Melastoma dodecandrum Lour.[Method] The content of total flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.was determined by UVvisble spectrophotometry with rutin as reference substance，sodium nitritealuminum nitrate and sodium hydroxide as chromogenic agent at the detection wavelength of 500 nm.[Result] The rutin showed a good linear relationship at the range of 0.01-0.07 mg/mL（R2=0.999 8）.The average recovery rate was 99.34%，and the relative standard deviation was 0.56%.[Conclusion] The method is simple and reliable，reasonable，specific，reproducible and provides experiment basis for the development of Melastoma dodecandrum Lour..

Key wordsMelastoma dodecandrum Lour.；Total flavonoids；UVvisble spectrophotometry

基金項目国家级大学生创新创业训练计划项目（贵中医大创合字〔2015〕 12号）。

作者简介杨菁（1988—），女，贵州黔东南人，助理实验师，硕士，从事中药药效物质基础及质量标准研究。

收稿日期2017-05-12

地稔为野牡丹科植物地稔（Melastoma dodecandrum Lour.）的干燥全草，主要分布于長江以南的广西、福建、贵州、云南等地[1]。地稔具有活血止血、清热解毒、化湿等功效，临床上主要用于治疗高热、咽喉肿痛、赤白血痢疾、黄疸、水肿痛经、崩漏等[2-3]。研究表明，地稔主要含黄酮类[4]、多糖类、氨基酸[5]等化学成分[6-7]，其中黄酮类化合物为主要有效成分之一，以芦丁、槲皮素、山奈酚为主[8-9]。目前，人们对地稔的研究主要集中在化学成分、药理作用、营养保健[10-11]等方面，鲜见对地稔总黄酮进行含量测定、提取工艺的研究报道。鉴于此，笔者对地稔中总黄酮含量进行了测定，以期为地稔药材的进一步开发利用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器。UV-5900紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）、J223BC型万分之一分析天平（江苏常州市双杰测试仪器厂）、SYG-2型数显恒温水浴锅（江苏常州朗越仪器制造有限公司）、101-1AB电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）、WM数控超声波控制仪（贵州味美食品工业有限公司）。

1.1.2试剂。地稔药材采自贵州省龙里县羊场镇羊场中学附近山头；芦丁对照品（贵州迪大生物科技有限责任公司，批号：GZDD-0001，>98%）；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝（天津市恒兴化学试剂制造有限公司），试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1对照品溶液的制备。称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品12.50 mg，置于25 mL容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，即得0.500 0 mg/mL对照品溶液。

1.2.2供试品溶液的制备。称定地稔药材粉末0.5 g，置于圆底烧瓶中，加入50 mL 60%乙醇溶液，称重，在90 ℃下回流提取1 h，放冷至室温，用60%乙醇补足减失的质量，过滤，即得供试品溶液。

1.2.3标准曲线的绘制。移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL对照品溶液于25 mL容量瓶中，依次加入6% NaNO2溶液0.6 mL、8% Al（NO3）3溶液1.0 mL和2% NaOH溶液4.0 mL，用水定容，显色15 min，于500 nm波长处测定吸光度，以浓度（C）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.4测定波长的选择。量取对照品溶液3 mL及供试品溶液4 mL，按照“1.2.3”方法显色，以相应试剂为空白，在200～700 nm波长处进行扫描。

1.2.5精密度试验。移取4.0 mL芦丁对照品溶液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法显色，在500 nm波长处测定吸光度，反复测试6次，计算吸光度和相对标准偏差。

1.2.6稳定性试验。称取地稔粉末0.5 g，置于圆底烧瓶中，按照“1.2.2”方法操作，移取4 mL供试品溶液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法显色，分别在0、2、4、6、8、24 h测定吸光度，考察其稳定性。

1.2.7重复性试验。称取同一批地稔粉末0.5 g于圆底烧瓶中，共6份。按照“1.2.2”方法操作，移取供试品溶液4 mL于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法显色，测定吸光度，计算总黄酮含量和相对标准偏差。

1.2.8加样回收试验。称取同一批地稔粉末6份，各0.2 g，于圆底烧瓶中，分别加入适量芦丁对照品，按照“1.2.2”方法操作，移取4 mL滤液于25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”方法显色，测定吸光度，计算回收率和相对标准偏差。

2结果与分析

2.1测定波长的选择由图1可知，芦丁对照品溶液与供试品溶液均在500 nm波长处有最大吸收，且干扰较小，故确定500 nm为测定波长。

2.2标准曲线绘制由图2可知，线性回归方程为y=11.614x+0.026 6（R2=0.999 8），表明芦丁对照品浓度在0.01～0.07 mg/mL时与吸光度呈良好的线性关系。

2.3精密度精密度的相对标准偏差为0.29%，表明仪器精密度良好。

2.4稳定性吸光度的相对标准偏差为0.66%，表明该方法在24 h内稳定性良好。

2.5重复性计算得总黄酮的平均含量为3.82%，相对标准偏差为0.91%，表明该方法重复性良好。

2.6加样回收率由表1可知，芦丁的平均加样回收率为99.34%，相对标准偏差为0.56%，表明该方法准确度较高。

3结论

总黄酮的显色方法主要有硝酸铝显色法和三氯化铝显色法，该研究对这2种显色方法分别进行了考察，通过比較对照品溶液和供试品溶液的吸收曲线，发现采用硝酸铝显色法显色后，所得吸收曲线有明显的吸收峰，所以选择硝酸铝显色法。

地稔中主要黄酮化合物为槲皮素和芦丁，通过硝酸铝显色方法显色后比较吸收曲线，结果表明以芦丁为对照，所得吸收曲线与供试品溶液相似，所以选择芦丁作为对照品。

试验以60%乙醇为提取溶剂，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂，采用紫外-可見分光光度法测定地稔中总黄酮含量为3.82%，且精密度、重复性、稳定性、加样回收率试验结果表明，该测定方法操作简单，结果稳定、可靠。

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