核蛋白Sam68的原核表达及鉴定

张华，陈宁，丁筠，邹德华，潘子夜，李鹏飞，李丽阳，肖丽杰，曹宏伟

（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319；2.哈尔滨医科大学附属第五医院肾内科）

核蛋白Sam68的原核表达及鉴定

张华1，陈宁1，丁筠1，邹德华1，潘子夜1，李鹏飞2，李丽阳1，肖丽杰1，曹宏伟1

（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319；2.哈尔滨医科大学附属第五医院肾内科）

为了构建pGEX-4T-1-Sam68原核表达载体，表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白，采用PCR扩增Sam68基因，插入pGEX-4T-1的EcoR I和Sal I位点，并转化Rosetta（DE3）大肠杆菌，IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达，GST pull-down技术验证Sam68的结合活性。酶切和测序结果证实Sam68基因正确插入pGEX-4T-1载体中，载体能够在Rosetta（DE3）细胞中正确表达，且纯化的GST-Sam68蛋白具有与PI3K p85特异结合的活性，说明成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Sam68。

Sam68；原核表达；载体构建；鉴定

Sam68（Src associated in mitosis 68 kDa，Sam68）属于RNA结合蛋白（RNA-binding proteins，RBPs）信号转导与RNA活化蛋白家族（signal transduction and activation of RNA，STAR）成员，是酪氨酸激酶Src的靶蛋白，在细胞增殖和分化过程中发挥着重要的作用，可调控细胞周期进程及细胞凋亡[1]。Sam68表达广泛，在信号转导，基因转录和选择性剪接中起着重要的作用，与细胞内的许多信号分子，包括Src、Grb2、Grap、SHP-1、PLCγ1/Fyn、BRK和PI3K等存在相互作用，参与T细胞受体、胰岛素受体信号转导及Ras和PI3K激酶途径[2-3]。实验观察表明，Sam68与多种肿瘤发生、信号转导途径相关，特别是在内分泌有关的癌症中Sam68发挥着关键作用[4]。同时，近期研究也发现Sam68在脂肪细胞和神经元的发育过程中也扮演着重要的角色，与骨质疏松、肥胖、不孕不育、性共济失调及神经系统疾病也存在着一定的关系[5-7]。为了进一步了解……