梅花鹿胸腺素beta10基因真核表达载体的构建及鉴定

王佳雯 高云鹏 孙天霞 刘美辰 赵雨 王思明

（长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心，长春130117）

梅花鹿胸腺素beta10基因真核表达载体的构建及鉴定

王佳雯 高云鹏 孙天霞 刘美辰 赵雨 王思明

（长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心，长春130117）

转录组测序发现Tβ10在鹿茸中高表达，为了研究Tβ10与鹿茸生长发育间的关系，构建Tβ10真核表达载体。使用Trizol法提取梅花鹿鹿茸总RNA，PCR技术特异性扩增梅花鹿Tβ10基因，利用酶切位点将目的片段插入真核表达载体VR1012构建表达质粒，通过Fugene®6将质粒瞬时转染到293T细胞中，使用Western blotting和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果发现克隆得到的梅花鹿Tβ10基因长度为129bp，编码42个氨基酸，成功构建真核表达载体VR1012- Tβ10-HA，转染后使用Western blotting方法检测到梅花鹿Tβ10在293T细胞中表达，免疫荧光方法证明梅花鹿Tβ10主要定位在细胞浆中。

梅花鹿；胸腺素beta10；质粒构建；转染；真核表达

胸腺素（Thymosin）是一类在人类的健康和疾病中发挥不同重要作用的小分子蛋白。根据等电点的不同分为3个家族：胸腺素α（pI＜pH5.0），胸腺素β（pH5.0＜pI＜ph7.0），胸腺素γ（pI＞pH7.0）［1］。胸腺素β10是β族胸腺素中的一个重要成员，属于Tβ4的一种类似物［2］，包括43个氨基酸残基，具有两个α螺旋结构。目前对Tβ10的研究集中于其在肿瘤［3-7］、胚胎［8］、神经发育系统［9］和炎症细胞［10-12］中的差异表达，以及Tβ10在血管发生［13］、细胞生长和凋亡［14-16］方面的作用。同时，Tβ10被认为与细胞骨架结构有关，影响细胞形态、细胞增殖、运动型等［17-20］。本实验室通过前期实验结果，发现Tβ10在鹿茸快速生长期高度表达，说明Tβ10可能与鹿茸的生长和再生相关。……