蛋白激发子Hrip1互作蛋白的筛选及其原核表达

李书鹏 杨秀芬 袁京京 邱德文

（中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100081）

蛋白激发子Hrip1互作蛋白的筛选及其原核表达

李书鹏 杨秀芬 袁京京 邱德文

（中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100081）

蛋白激发子Hrip1是从极细链格孢菌（Alternaria tenuissima）中分离纯化出的一种新型超敏反应诱导蛋白，能激发烟草、拟南芥和水稻等多种植物的免疫防御反应，提高广谱抗病性。为了探究Hrip1诱导植物抗性反应的分子机制，以Hrip1为诱饵蛋白，通过酵母双杂交，在水稻cDNA文库中筛选Hrip1的互作蛋白。经回转验证和x-a-gal染色得到了一个Hrip1互作蛋白-CSN5。构建了互作蛋白CSN5的原核表达载体pGEX-6P-2-CSN5，并转化大肠杆菌表达菌株BL21。经IPTG诱导后获得了可溶性的融合表达蛋白，用GST亲和层析柱纯化获得单一条带的融合表达蛋白，并用Western blot鉴定了融合表达蛋白的正确性。研究结果为进一步鉴定Hrip1的互作蛋白及其功能奠定了基础。

蛋白激发子；互作蛋白；酵母双杂交；原核表达

蛋白激发子是一类能激发植物获得性抗性，增强植物自身免疫的蛋白质，在植物保护上发挥着重要作用［1-4］。激发子诱导植物产生抗性的过程主要包括植物受体对激发子的识别、信号传导，以及下游抗性相关基因表达调控等［5-7］。植物对激发子的识别是触发植物免疫信号传导的开关，候选互作蛋白的鉴定与功能研究将为深入了解植物与病原微生物的互作、揭示蛋白激发子诱导植物产生抗性的作用机制奠定坚实的基础。……