民族药地板藤中总黄酮含量的测定

张文平 张晓平 邓 杰 饶高雄，3*

1.云南中医学院中药学院， 云南 昆明 650500；2.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355； 3.云南特安呐制药股份有限公司，云南 文山 663000



民族药地板藤中总黄酮含量的测定

张文平1张晓平2邓 杰1饶高雄1，3*

1.云南中医学院中药学院， 云南 昆明 650500；2.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355； 3.云南特安呐制药股份有限公司，云南 文山 663000

目的：建立地板藤药材中总黄酮含量的测定方法。方法：采用分光光度法，以芦丁为参照品，硝酸铝作显色剂，在510nm处测定样品中总黄酮的含量。结果：芦丁在0.014～0.084mg·mL-1范围内呈良好的线性关系，r=0.9964，平均加样回收率为101.16%，RSD=1.75%。结论：该方法简便、快速，结果准确、可靠，重现性好，适用于地板藤中总黄酮含量的测定。

地板藤；总黄酮；紫外分光光度法

地板藤为桑科植物地石榴(FicustikouaBur.)的藤茎，资源丰富，主要分布于云南、贵州、广西、西藏、四川、甘肃、陕西南部等地;云南省内以滇南、滇东南资源最为丰富，主产于文山、玉溪、红河等地，该药材是云南省地方习用药材，也是彝、壮、苗、哈尼等民族广泛使用的民族药，用药历史悠久，是独具特色的地方中草药之一[1]。本品性凉，味苦、微涩，具有清热利湿、收敛止痢、解毒消肿的功效，主要用于痢疾、泄泻、黄疸、水肿、风湿疼痛和无名肿毒[1]。2015版药典并未收载该药，仅有地方标准可供参考[2]。地板藤药材中黄酮类成分含量较多，在心血管系统、抗菌抗病毒、抗炎抗氧化和保肝方面具有较好的生物活性[3-6]。但该药材质量稳定度不高，因此其黄酮类成分含量的测定对地板藤药材质量标准的制定及该药材的推广意义重大。笔者采用紫外分光光度法对地板藤中的总黄酮进行测定，以期为地板藤质量标准的提高和药材中黄酮类化合物的开发及利用提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-2450可见紫外扫描仪(日本岛津科技公司)，UV-2000可见紫外分光光度计(上海奥析科学仪器有限公司)，YB-500型多功能粉碎机FA1004N电子天平(上海津平科学仪器有限公司)，YP502电子天平(上海津平科学仪器有限公司)。

1.2 试剂与样品 芦丁对照品(批号：150427A，芦丁含量≥98%，南京景竹生物科技有限公司)；其它试剂均为分析纯。地板藤药材购于昆明螺蛳湾药材市场或采挖于云南宣威、昆明西山、昆明呈贡、楚雄等地且采收时间不同，经晒干粉碎后备用。药材来源详见表1。

表1 地板藤药材来源

2 方法与结果

2.1 标准溶液的制备 精密称取3.5mg芦丁标准品，用无水甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，摇匀。此芦丁对照品溶液浓度为0.35mg·mL-1，备用。

2.2 样品溶液的制备 准确称取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加热回流2h，抽滤，并用甲醇冲洗滤渣3次，合并滤液，定容至100mL。

2.3 测定波长的选择 准确量取标准溶液和样品溶液适量，置于10mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液0.2mL，混匀，放置5min；再加10%硝酸铝溶液0.2mL，放置6min；然后加4%氢氧化钠溶液2mL，混匀，放置15min，定容，过滤，在200～800nm波长处扫描，对照品与供试品溶液显色后均在510nm波长处有最大吸收，故将510nm作为测定波长。紫外扫描光谱详见图1。

2.4 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁标准溶液0.0 、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4mL于10mL容量瓶中，用60%乙醇补充至5mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.2mL，混匀，放置5min；再加入10%硝酸铝溶液0.2mL，摇匀，放置6min；然后加入4%氢氧化钠溶液2.0mL，再加入60%乙醇至刻度，摇匀，放置15min后，分别于510nm波长处测定吸收度，以吸收度值(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程Y=10.88X-0.1173，r=0.9963。结果表明，芦丁检测浓度在0.014～0.084mg/mL范围内线形关系良好。标准曲线见图2。

2.5 方法学考查

2.5.1 精密度试验 取“2.1”项下溶液于510nm波长处测吸收度5次。结果，吸收度平均值为0.5696，RSD=0.36%。表明该方法精密度良好。

2.5.2 重现性试验 准确称取药材样品5.0g，共5份，按所定条件进行平行试验，依法处理，于510nm波长处测定吸收度。结果显示，总黄酮的平均含量为0.013%，RSD=1.26%，表明本方法重现性良好。

2.5.3 稳定性试验 取“2.2”项下供试品溶液，于0、2、4、6、24h时测定吸收度。结果显示，吸收度RSD=1.21%，表明药材经提取后，溶液在24h内稳定性良好。

2.5.4 加样回收率试验 精密称取地板藤药材5份，5.0g/份，分别加入标准品溶液0.3mL(浓度为90.5μg·mL-1)于10mL容量瓶，按样品溶液的制备方法处理，依法测定含量，计算加样回收率和RSD值。测得平均回收率为98.94%，RSD=1.91%。结果见表2。

2.6 样品含量测定 分别用“2.2”项下方法提取样品溶液，精密移取1mL于10mL容量瓶中，按“2.3”中方法配制各样品供试液，平行测定5次，以标准曲线计算出药材总黄酮含量。实验结果见表3。

表2 地板藤药材中总黄酮加样回收率试验结果

表3 不同产地地板藤中总黄酮含量

2.7 结果 不同产地的地板藤药材总黄酮含量差异较大，其中来源于楚雄、云南宣威的地板藤药材中总黄酮含量最低为0.48%，购于昆明螺蛳湾药材市场和采挖于昆明呈贡的地板藤药材中总黄酮含量最高为1.84%。

3 讨论与小结

3.1样品前处理方法的选择

为了准确测定样品中总黄酮含量，根据参考文献对提取方法、提取时间、提取料液比、提取预处理进行了考察。在所考察的加热回流提取、超声提取方法中，加热回流提取方法的提取率更高，但用石油醚50mL加热回流1h预处理后，总黄酮量损失较多。在所考察的提取时间加热回流提取1.5h和2.0h中，加热回流2.0h能更多提取出样品总黄酮。提取料液比1∶10提取率较好。最终选择准确称取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加热回流2h，抽滤，并用甲醇冲洗滤渣3次，合并滤液，定容至100mL。

3.2 对照品的选择

经查文献[4-6]，发现至今没有对地板藤总黄酮含量测定的相关研究，而相关研究表明地板藤中确实含芦丁、柚皮素、槲皮素等黄酮类成分，对芦丁、槲皮素、地板藤提取液进行了紫外200～800nm全波长扫描[7-10]，芦丁与地板藤提取液在510nm处有共同吸收，槲皮素与地板藤提取液无共同吸收峰。故本实验选用芦丁作为对照品。

3.3小结

黄酮类化合物分布广泛，具有多种生物活性，地板藤中含有多种黄酮类成分，但有关地板藤总黄酮含量测定目前尚未见报道。故本研究用分光光度法对地板藤中的总黄酮进行测定，并进行了方法学的考察。结果表明本实验方法操作简单易行，结果准确可靠，为地板藤质量标准的提高与地板藤黄酮类化合物的开发和利用提供科学依据。

[1]国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草(第2卷)[M].北京:人民卫生出版社，2001：3.

[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [S]．北京：中国医药科技出版社出版，2015．

[3]郭良君，谭兴起，郑巍，等. 地瓜藤化学成分研究[J]. 中草药, 2011, 42(9)：1709-1711.

[4]关永霞，杨小生，佟丽华，等. 苗药地瓜藤化学成分的研究[J]. 中草药，2007，38(3)：342-344.

[5]杨世波，张润芝，江志勇，等. 地板藤根的化学成分研究[J]. 中成药， 2014，36(3)：554-558.

[6]唐丽萍，房秀艳，蒋晖，等． 云南习用药材地板藤的质量标准研究[J]. 云南中医学院学报，2007，30(4)：13-16.

[7]吕鹏，贾秀梅，张振凌，等. 怀山药及非药用部位总黄酮含量测定[J]. 中国实验方剂学杂志，2012，18(2)：65-68.

[8]钟方丽，王晓林，孙晓雨，等. 刺玫叶中金丝桃苷和总黄酮含量的测定[J]. 食品科学，2013，34(2)：231-235.

[9]李艳提，赵金凤，张卫明，等. 罗布麻茶总黄酮含量测定方法研究[J]. 食品科技，2010，35(6)：274-277.

[10]郭丽冰，王蕾. 降香总黄酮含量测定方法的研究[J]. 中药材，2008，31(5)：694-696.

Study on the Determination Method of Total Flavonoids in Ficus Tikoua Bur.

ZHANG Wenping1ZHANG Xiaoping2DENG Jie1RAO Gaoxiong1,3*

1.College of Pharmaceutical Science,Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China; 2.College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Ji’nan 250355, China; 3.Yunnan Daphne Pharmaceutical Co.LTD, Wenshan 663000，China

Objective To establish methods for the determination of total flavonoids in Ficus tikoua Bur. Methods Total flavonoids were quantified by UV spectrophotometry at 510nm, using rutins as reference substance and aluminum nitrate as chromogenic agent. Results The linear ranges of rutin was 0.014～0.084 mg·mL-1(r=0.9964) and the average recovery rate was 101.16% withRSDof 1.75%. Conclusion The method was simple, rapid and accurate, which can be used for the total flavonoids of Ficus tikoua Bur.

Ficus Tikoua Bur.; Total Flavonoids; UV Spectrophotometry

云南省科技强省计划项目-特色天然药调经养颜胶囊大品种培育及二次开发(2014AE007)；大学生创新创业计划项目—民族药地板藤止血作用、hplc指纹图谱与质量标准完善研究(31050401000)。

张文平(1981-)，女，汉族，讲师，博士研究生在读，研究方向为中药药剂与质量标准。E-mail：455692426@qq.com

饶高雄(1965-)，男，汉族，教授，硕士研究生导师，研究方向为中药化学及中药质量控制。E-mail：917884128@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2017)11-0025-03

2017-01-07 编辑：梁志庆)