高灵敏小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法的构建

宋秀春，汤迎春，杨 夏

(1.内蒙古呼伦贝尔市人民医院，内蒙古 海拉尔 021008；2.内蒙古包钢医院，内蒙古 包头 014010)



高灵敏小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法的构建

宋秀春1,2，汤迎春1，杨 夏2

(1.内蒙古呼伦贝尔市人民医院，内蒙古 海拉尔 021008；2.内蒙古包钢医院，内蒙古 包头 014010)

目的 为从天然化合物中高效筛选具有体液免疫抑制活性的先导化合物，本研究将构建高灵敏且价格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法。方法 利用山羊抗小鼠IgG的Fc段抗体、生物素标记的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗体、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素构建小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法；通过对包被抗体浓度、检测抗体浓度和链霉亲和素浓度的优化，使检测方法灵敏度达到最高；再利用该检测方法检测体外培养小鼠B细胞上清中IgG浓度验证方法的有效性。结果 在山羊抗小鼠IgG的Fc段抗体浓度达到5 μg·mL-1，生物素标记的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗体浓度达到0.25 μg·mL-1，辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素浓度达到0.5 μg·mL-1，小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法灵敏度达到最高(0.05 ng·mL-1)，线性范围在0.1～10 ng·mL-1；该检测方法可以高灵敏检测体外培养LPS刺激小鼠B细胞分泌的IgG抗体。结论 本研究成功构建高灵敏且价格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA检测方法。

小鼠免疫球蛋白；IgG；ELISA；灵敏度

自身免疫性疾病、过敏性疾病和器官移植排斥是严重危害人类健康的免疫失调性疾病，目前临床主要应用糖皮质激素、环孢素、他克莫司等免疫抑制剂对其进行治疗。由于这些常用免疫抑制剂缺乏特异性，可导致代谢紊乱、血液毒性和肝肾毒性等不良反应，严重影响了上述疾病的治疗[1-3]。……