新型四肽亲水材料用于糖肽的高效富集

陈成+王宏喜+康虹健+姚要+卿光焱+李秀玲+梁鑫淼

摘 要 本研究采用原子转移自由聚合（Atom-transfer radical-polymerization， ATRP）法合成了一种新型四肽亲水作用色谱材料 （Poly-DAPD），用于糖肽的选择性富集。通过氮气吸脱附、热重分析和X射线光电子能谱等技术进行表征，结果表明，四肽已成功接枝到硅球上。固相萃取富集实验表明，合成的亲水材料对牛胎球蛋白（Fetuin）糖肽富集选择性高； 与商品化ZIC-HILIC材料相比，Poly-DAPD材料富集掺有5摩尔倍数牛血清蛋白（BSA）的Fetuin样品时，在获得的糖肽数目及抗干扰性能方面都更具优势。此Poly-DAPD材料可进一步用于不同糖蛋白的糖基化分析研究。

关键词 亲水作用色谱； 四肽； 糖肽富集； 质谱

1 引 言

蛋白质糖基化是糖链通过共价键结合到蛋白上[1]。 糖蛋白参与许多重要的生命进程，如免疫应答、信息传递、细胞迁移等[2]。糖蛋白上糖链的改变会导致其所修饰的蛋白质结构和功能发生变化，甚至会导致疾病[3]。蛋白质的糖基化分析对其生物学功能及阐明相关疾病的致病机理具有重要意义。

蛋白质的糖基化分析通常通过质谱（Mass spectrometry， MS）分析实现[4]。虽然生物质谱的进步推动了蛋白质组学的发展，但由于复杂样品中糖肽浓度低，以及质谱分析中非糖肽对糖肽的离子抑制作用， 蛋白质的糖基化分析仍具有挑战性。因此，发展合适的糖肽富集方法具有重要意义。

近年来，科研工作者发展了一些糖肽富集方法，主要包括肼化学反应法[5]、硼酸化学反应法[6]、凝集素亲和法[7]和亲水作用色谱（Hydrophilic interaction liquid chromatography， HILIC）[8]等。每种方法在糖肽富集方面都有其自身的優缺点，如凝集素色谱法对糖肽的专一性高，但是只对含有某一类末端糖的糖肽有效。……