高灵敏甲胎蛋白夹心免疫传感器的制备

王雪+李鹏君+邱萍+王小磊

摘 要 构建了新型甲胎蛋白（AFP）夹心免疫传感器。采用金纳米粒子-氧化石墨烯-普鲁士蓝纳米立方体（AuNP-GO-PBNCs）纳米复合材料标记甲胎蛋白（AFP）二抗，将制備的金-聚多巴胺-四氧化三铁（Au-PDA-Fe3O4）磁性纳米复合物固定在自制的磁性电极表面，通过吸附作用固定AFP一抗，用牛血清白蛋白（BSA）封闭电极上的非特异性吸附位点。在37℃下与AFP抗原溶液孵育50 min，最后将电极放入AuNP-GO-PBNCs纳米复合材料标记的二抗溶液中孵育，基于此建立了采用普鲁士蓝（PB）标记的的夹心免疫传感器检测AFP的方法。在最佳实验条件下，PB催化H2O2氧化的响应电流与AFP的浓度表现出两段线性关系，线性范围分别为0.005～1.000 ng/mL和1～20 ng/mL， 检出限（LOD， S/N=3）为1.0 pg/mL。本方法具有灵敏度高、选择性好的特点。

关键词 金纳米粒子； 氧化石墨烯； 甲胎蛋白； 普鲁士蓝； 夹心免疫传感器

1 引 言

甲胎蛋白（AFP）是临床诊断中常用的特异性的肿瘤标志物，对原发性肝癌的早期诊断具有重要的临床意义。目前，检测血清中甲胎蛋白主要采用放射免疫法、电化学发光法、化学发光法和酶联免疫法等[1～5]。放射免疫法检测AFP能达到纳克水平，但存在放射性污染； 电化学发光法检测速度快，但检测成本比酶联免疫法高； 化学发光法技术较为成熟，但是检测时间较长； 酶联免疫法（ELISA）具有简单、灵敏、特异、快速及易于自动化操作等特点，在生物工程[6]、临床诊断[7～9]、药物及环境分析[10～12]等方面应用广泛。ELISA法通常采用酶标记抗体（或者抗原），标记酶通常是分子量小、易制备的辣根过氧化酶（HRP）[7，12～14]。……