消肿喷剂对急性骨骼肌损伤小鼠肌组织NO 、MDA、SOD表达的影响*

牛淑亮，杨 涛，王水泉，陈胜国△

1.新疆医科大学(乌鲁木齐830011)，2.新疆医科大学第四附属医院(乌鲁木齐830011)

消肿喷剂对急性骨骼肌损伤小鼠肌组织NO 、MDA、SOD表达的影响*

牛淑亮1，杨 涛2，王水泉1，陈胜国1△

1.新疆医科大学(乌鲁木齐830011)，2.新疆医科大学第四附属医院(乌鲁木齐830011)

目的：探讨急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织NO 、MDA、SOD表达及消肿喷剂的干预作用。方法：打击建立急性软组织损伤(气滞血瘀证)小鼠模型，分为空白组、模型组、正红花油组和消肿喷剂组，观察各组肌组织NO、MDA、SOD表达情况。结果：NO与MDA在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠损伤肌组织中均有较高水平表达，消肿喷剂和正红花油能降低其在损伤肌组织中的表达；SOD在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠损伤肌组织中表达水平低，消肿喷剂能够影响其在伤肌组织中的表达。结论：NO、MDA、SOD在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织中表达具有较强敏感性，消肿喷剂可能通过干预其表达，促进骨骼肌损伤修复。

急性骨骼肌损伤是日常生活中常见、多发损伤，主要原因包括机械性损伤、挤压伤、拉挫伤等。外力损伤，致经脉受损，气血荣卫不行，筋肉失于濡养，发为红肿热痛，活动失利，辨证当属“气滞血瘀证”。气属阳、血为阴，气滞血瘀，阴阳失根，是本病的根本所在，故在治疗根本上应为调阴阳、和荣卫，具体方法宜为凉血活血、化瘀行气，以通经和络，濡养筋骨。本实验研究了氧化/抗氧化平衡相关指标NO 、MDA、SOD在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织中表达情况，报告如下。

材料与方法

1 实验动物 昆明种小鼠120只，雄性，体重20±2g(新疆医科大学大学实验动物中心提供)。

2 实验仪器 采用自制骨骼肌损伤打击器，Thermo生产MULTISKAN MK3酶标仪，美国PRO* Multi-Prep多样品均质器，ESJ182-4电子天平，Hettich生产MIKRO 22R低温离心机。

3 实验用药 苏木、桅子各30 g，生川乌24 g，姜黄、延胡索、生半夏、胆南星、三七各18 g，乳香、没药、血竭各12 g，冰片6 g，涤净风干后粉碎(血竭、冰片除外)，过20目筛，将药粉以10倍75%酒精浸泡7×24 h，成棕红色液体，过滤，取溶液即得消肿喷剂原液[1]，装瓶备用。正红花油为成都东洋百信制药有限公司生产。

4 耗材与试剂 AR110096孔单条可拆式酶标板，AR1103ELISA用ABC，AR1104TMB显色剂，AR1105终止液，AR1107生物标记素抗体，NO试剂盒、MDA试剂盒、SOD试剂盒等均购自武汉博士德生物工程有限公司。

5 实验造模 急性骨骼肌损伤模型参考文献[2-3]方法，利用重力势能E=mgh，以约0.2焦耳势能自由落体冲击小鼠右后肢股部肌肉(m=50 g，h=40 cm)，皮肤破损或骨折予以排除，造成小鼠急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)。

6 分组与给药 昆明种小鼠120只，分为空白组，模型组，对照组和实验组。空白组，正常饲养，不予造模和给药。其余各自均已前述造模方法予以打击造模，造模后，模型组自我康复，不予给药。对照组于造模后24 h给予正红花油外用，6 h/次，4次/d，连续给药 5 d。实验组于造模后24 h给予消肿喷剂外用，6 h/次，4次/d，连续给药5 d。各组于给药后第1 d、第 3 d、第5 d(末次给药后4 h)，分别取小鼠10 只脱颈处死，取股部伤处肌肉，置于-20 ℃冰箱保存备用。

7 指标测定 NO、MDA表达水平和SOD活性严格按照NO试剂盒、MDA试剂盒、SOD试剂盒说明书步骤方法，进行测定。

8 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行处理，所得实验数据均以均数±标准差表示，组间差异性通过两样本t检验比较，P<0.05表示差异具有统计学意义。

结 果

1 两组NO与MDA指标变化比较 NO与MDA在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠损伤肌组织中均有较高水平表达，实验药物消肿喷剂和对照药物正红花油均能降低其在损伤肌组织中的表达，且两种药物具有相似作用，见表1，表2。

2 两组SOD指标变化比较 SOD在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠损伤肌组织中表达水平低，消肿喷剂能够较早的影响其在伤肌组织中的表达，而促进创伤恢复，见表3。

表1 损伤局部骨骼肌NO表达情况(nmol/g)

注：与模型组比较，#P<0.05，*P<0.01

表2 损伤局部骨骼肌MDA表达情况(nmol/g)

注：与模型组比较，#P<0.05，*P<0.01

表3 损伤局部骨骼肌SOD活性表达情况(U/L)

注：与模型组比较，#P<0.05，*P<0.01

讨 论

急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)属于中医“筋伤”范畴，“损伤之症，肿痛者，乃瘀血凝结作痛也”，“忽然闪挫，必气为之震，震则激，激则雍”。跌扑闪挫，致经脉受损，气机失利。气机失利，阴阳失和，人体正常的氧化还原状态遭到破坏，是急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)重要病理因素。消肿喷剂君药苏木“主破血”，具有活血疗伤、驱瘀通经之功；桅子“解热瘀，行结气”，可凉血解瘀，消肿止痛。臣药姜黄辛散温通，活血力强；延胡索“能行血中气滞，气中血滞”，专治一身上下诸痛；乳香、没药“散血消肿、定痛生肌”，共助行气血、祛瘀肿之功。佐以生川乌、生半夏、胆南星，散结通络止痛；三七“止血、散血、定痛”；血竭“散滞血诸痛”。 使以冰片，“透骨热”、“性走而不守”，引诸药归病所。诸药合奏，可使气血调畅，阴阳平和，恢复伤肢正常功能。现代医学研究也证明，苏木提取物能够降低血清MIP-1β 水平，而MIP-1β不仅能够促进炎性反应，而且还能促进活性氧簇ROS可诱导细胞粘附分子的表达[4]；栀子苷发酵物栀子蓝色素有较好的自由基清除能力[5]。所含姜黄等也具有清除氧自由基作用[6]。

实验中，模型组损伤肌组织第1 d，第3 d，第5 d，NO 表达水平较空白组均具有显著差异性，说明NO在急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)骨骼肌具有很强的敏感性，并能反映急性骨骼肌损伤的炎症水平。内源性NO是左旋精氨酸(L-Arg) 的信号分子，在还原性辅酶Ⅱ(NADPH )等因子辅助下，由一氧化氮合酶(NOS) 催化合成，生成的NO具有细胞毒作用[7]，参与介导免疫反应，可引起细胞和组织的损伤。实验药物消肿喷剂与对照药物正红花油在均能通过降低急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织NO表达，以促进损伤愈合。

MDA是LPO的主要产物，MDA在骨骼肌量能够反映局部细胞受到自由基攻击的严重程度[8]。SOD为机体专一清除氧自由基的特异性抗氧化酶，可反映机体清除自由基能力[9]，通过有效清除体内过多的氧自由基，保持氧化状态的动态平衡，避免因自由基的产生与清除脱节，导致的一系列病理反应。急性骨骼肌损伤后损伤局部肌组织发生充血和缺氧，使得细胞线粒体传递链发生脱偶联，损伤局部氧化/抗氧化平衡失衡，自由基的产生与清除脱节，大量氧自由基堆积于损伤局部，低浓度氧自由基为机体维持生命活动所必需，但当浓度过高时，自由基能攻击生物膜磷脂中的不饱和脂肪酸，导致脂质过氧化，并形成大量过氧化产物LPO。实验中，与模型组对照，实验药物消肿喷剂第1天，第3天和第5天，均能显著降低急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织MDA表达，以减轻自由基对局部细胞的攻击程度实验药物消肿喷剂第1天，第3天，显著提高了急性骨骼肌损伤(气滞血瘀证)小鼠肌组织SOD活性，保护细胞免受氧自由基损伤。

[1] 牛淑亮,王水泉,伊斯拉伊力.消肿喷剂化瘀作用的实验研究[J].陕西中医,2015,36(8):1088-1090.

[2] McBrier N M,LeKan J M,Druhan L J,etal. Therapeutic ultrasound decreases mechano-growth factor messenger ribonucleic acid expression after muscle contusion injury[J].Arch Phys Med Rehabil，2007,88(7):936-940.

[3] 刘 勇,柏 合,徐世文.复方中药软膏对小鼠急性软组织损伤中炎性因子的影响[J].中兽医学杂志,2015,10(3):10-11.

[4] 张 芯,杨建飞.苏木乙酸乙酯提取物对动脉粥样硬化模型大鼠血清MIP-1β的影响[J].中医药信息,2013,(4):22-24.

[5] 尹 燕,黄相中,关小丽.栀子蓝色素的制备及其抗氧化活性研究[J].云南民族大学学报：自然科学版,2014,23(4):243-247.

[6] 王中晓.姜黄提取物对脑缺血-再灌注大鼠一氧化氮及氧自由基的影响[J].临床合理用药杂志,2012,5(30):21-21.

[7] 封 敏,师晓莉,苗 娜,等.乙醇诱导急性胃炎大鼠NOS的表达研究[J].新疆医科大学学报,2013,36(7):927-929.

[8] 周晶晶,黄小民.脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌NF-κB和SOD、MDA的影响[J].中国中医急症,2014,23(7)，1231-1232.

[9] 米志宽,韩继明,阮彩莲.有氧运动延缓大鼠脑组织衰老的实验研究[J].陕西医学杂志,2016,47(4):389-390.

(收稿：2017-03-29)

*新疆维吾尔自治区十二五教育规划课题项目(142061)新疆医科大学创新基金项目(XJC201333)

△通讯作者

创伤和损伤/中医药疗法 肌肉 血瘀气滞 @消肿喷剂

R685

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.08.076