Annexin A3在三阴乳腺癌中的表达及其临床意义①

王 新，卢玉元

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

Annexin A3在三阴乳腺癌中的表达及其临床意义①

王 新，卢玉元

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：探索讨论三阴乳腺癌(TNBC)组织中Annexin A3的表达及其临床意义。方法：搜集本院从2012-01～2015-12共100例非三阴乳腺癌(non-TNBC)组织中使用随机区组的方式选择50例组织标本，TNBC组织标本50例,癌旁正常组织标本50例为对照组，各组间进行对比分析。应用免疫组织化学的方法检测Annexin A3在TNBC组织、non-TNBC组织和癌旁组织中被表达的情况，探讨Annexin A3能否有望成为TNBC的特异性指标，分析总结TNBC的临床病理特征与Annexin A3表达情况有无相关性。结果：Annexin A3在TNBC 50例样本组织中的阳性表达率为31/50(62%)，癌旁组织阳性表达率为5/50(10%)，前者与后者相较，前者明显高于后者，差异具有统计学意义(P<0.05)。与non-TNBC(阳性表达率62%)比较，前者与后者统计学上差异不大，无意义(P>0.05)。患者年龄、病理类型、肿瘤大小、腋淋巴结有无转移、临床分期、家族史等均与Annexin A3在TNBC中的表达情况无明显的相关性(P>0.05)。 结论： Annexin A3可能参与乳腺癌的发生和发展的过程，它可能是肿瘤患者预后差的一个危险因素。TNBC临床病理特征与Annexin A3的表达无关联。它虽然不是TNBC的独特的检测指标，但可作为一种有价值的乳腺癌的预后标记物，有望被作为乳腺癌患者的预后不佳的非特异性标志。

Annexin A3；TNBC；non-TNBC

乳腺癌是一种具备高度异质性的占全国恶性肿瘤比例7%～10%的女性常见恶性肿瘤，其发病率仅次于宫颈癌，其发病率近年来逐年上升并有超越宫颈癌的态势。甚至于在某些地区，高居首位的影响女性健康的恶性肿瘤已经被认为是乳腺癌[1]。乳腺癌当中的ER、PR与Her-2表达均为阴性的一种类型被称之为三阴乳腺癌(TNBC)。绝经前的年轻女性较为多发，主要特点为恶性程度高、预后较差[2]。它与BLBC相较，因其在免疫表型、组织形态和临床表现等多方面都有很多相似之处，从而引起各国肿瘤学家的高度关注。Nielsen等[3]学者将ER、PR与Her-2的表达均为阴性作为基底样乳腺癌的主要特征。TNBC在分子生物学行为、临床病理特征等多方面都具有独特性，而且与其他类型乳腺癌相比，其预后更差。因为病理特征的特殊性，故不能采取内分泌等相关治疗，目前也没有相应的免疫治疗和靶向治疗的药物或者方法。为了找到合适的靶向治疗依据和理想的肿瘤标志物，这次试验采取免疫组化的方法检测Annexin A3在TNBC组织中的表达情况及其临床意。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集佳木斯大学附属第一医院住院部及门诊部从2012-01～2015-12共100例非三阴乳腺癌(non-TNBC)组织中使用随机区组的方式选择50例组织标本，TNBC组织标本50例,癌旁正常组织标本50例为对照组，各组间进行对比分析。两组患者性别均为女性，每组患者平均年龄分别为(34.7±10.5)岁和(36.6±10.5)岁。

1.2 试剂和方法

浓缩型鼠抗人Annexin A3单克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限公司、SP试剂盒和DAB显色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化检测 Annexin A3在non-TNBC,TNBC和癌旁组织中的表达,首先将选取的标本蜡块按4μm厚度切片,每例5张切片，石蜡切片脱蜡后蒸馏水中漂洗5分钟，高压修复后取出切片放入蒸馏水冲洗两次，滴加一滴3%的过氧化氢溶液以阻断内源性过氧化物酶的活性，再次冲洗后滴加PH7.8的胃蛋白酶，滴加封闭液，滴加适当浓度的(Annexin A3稀释度为 1∶200)一抗，PBS冲洗后滴加二抗，每张切片加2滴新鲜配制的DAB工作液，显色情况通过显微镜观察，苏木紫染色 、分化液、返蓝，酒精、二甲苯依次脱水，中性树胶封片，晾干，PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3 阳性结果判定

由本院病理科两位主任医师对疫组织化学结果进行审阅，Annexin A3主要被着色于细胞的细胞质。阳性强度评分和阳性细胞占所有细胞的比例评分作为免疫组化评分标准，评分方法：①细胞数表达为阳性的评分方法：每张切片随机取5个高倍视野进行观察并计数阳性数细胞，将阳性率分为1%～24%、25%～49%、50%～74%、≧75%四个等级，分别记分为1分、2分、3分、4分。②判断染色强度的评分方式：0分为无染色，1分为显色明显比背景高的淡黄色颗粒，2分为浅棕黄色颗粒，3分为深棕黄色颗粒。阴性(-)结果为上述二者评分之和小于2分者，弱阳性(+)为2～3 分，中度阳性()4～5分，强阳性()为6～7 分[4]。

1. 4 统计学方法

采用χ2检验和四格表的精确概率法判断Annexin A3在各族资料中的表达与各病理指标的相互关系,运用spearman等级相关检验来判断Annexin A3在TNBC与non-TNBC组织之间的相互关系用

以P<0.05为差异具有统计学意义，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 免疫组化结果

Annexin A3主要被表达于组织的细胞核和细胞浆中，TNBC和癌旁组织中Annexin A3的阳性表达率分别为31/50(62%)和5/50(10%)。前后两组进行比较，差异显著，统计学上有意义(χ2=5.774P<0.05)。见图1、图2。

图1 Annexin A3在TNBC中的阳性表达(En Vision×400)

图2 Annexin A3在癌旁组织中的阳性表达(En Vision×400)表1 Annexin A3的表达与TNBC患者临床病理特征的关系

分组nAnnexinA3阳性数阳性率(%)χ2值P值年龄(岁) <35191052.61.142>0.05 ≥35312167.4肿瘤家族史 无302066.70.693>0.05 有201155.0病理类型 浸润性癌452760.00.764>0.05 其他类型5480.0肿瘤大小 ≤2cm7228.60.198>0.05 >2～5cn281967.9 ≥5cm151066.7腋淋巴结转移 无301756.70.905>0.05 有201470.0临床分期 Ⅰ期、Ⅱ期271866.70.543>0.05 Ⅲ期、Ⅳ期231343.5

2.2 TNBC临床病理特征与Annexin A3之间的表达情况的相互关系

患者的年龄、病理类型、肿瘤大小、腋淋巴结转移、临床分期、家族史等因素与Annexin A3的阳性表达率无关(P均>0.05)，见表1。

2.3 TNBC与non-TNBC组织Annexin A3的表达情况对比

Annexin A3主要表达于二者的细胞核和细胞浆中，其在non-TNBC中的阳性表达率为31/50(62%)，与癌旁正常乳腺组织相比较差异有统计学意义(P<0.05)，其与TNBC组相比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 Annexin A3在各类乳腺癌组织中的表达情况(n=50)

注：*与TNBC组比较；**与癌旁正常组比较；***与 non-TNBC组比较。

3 讨论

Annexin A3是一种约占体内细胞内总蛋白的2%[5]的磷脂结合蛋白超家族的成员之一，其超家族具有由70个氨基酸残基组成的保守的中心结构域和特异的N端序列，其与胞吐作用中的膜融合、囊泡的运输及钙离子通道的形成以及不同通路中的信号转导等膜转运等有关，另外还参与了一些依赖于钙调蛋白的通路，并能够参与调控细胞的分化、细胞骨架蛋白间的相互作用及炎性反应等不同过程。它还具有独特的 N 端序列，这种特异的N端序列与它所特有的功能相关联。其与患者的临床分期、有无淋巴结转移、肿瘤是否复发及患者的生存率下降等密切相关。在大部分恶性肿瘤中，Annexin A3在不同程度上都可检测到表达失调的情况，有研究[6～7]显示在肺腺癌中，Annexin A3的表达明显升高。Kollermann 等[8]的研究已经表明，Annexin A3的表达可以作为评价前列腺癌预后的独立指标之一。由于TNBC的高度异质性，并且目前没有发现有效的免疫治疗和靶向治疗等方式，虽对化疗有一定疗效，但其预后来看明显不如其他类型乳腺癌患者，有研究显示[9]，在传统化疗方案(紫衫类葱环类为基础)的基础上加用希罗达能显著改善TNBC患者的无复发生存期和总生存期。

为了寻找针对TNBC的独特的靶点，为其治疗和改善预后打开新的思路，本实验试图通过免疫组织化学(SP)法来检测Annexin A3的表达情况，结果表明：在TNBC和癌旁组织中Annexin A3的阳性表达率分别为(62%)和(10%)，前后两组进行比较，二者差异具有统计学意义(χ2=5.774，P<0.05)。表明在乳腺癌发生的早期分子生物学事件中，Annexin A3也参与其中，可能是肿瘤患者预后差的一个危险因素。TNBC患者的年龄、病理类型、肿瘤大小、腋淋巴结转移、临床分期、家族史等因素等与Annexin A3的表达均无明显相关性(P均>0.05)。表明各项临床病理特征与TNBC患者无相关性，不能作为评判TNBC独特性或者严重程度的指标。Annexin A3在TNBC与non-TNBC组织中的表达情况，二者无明显的差异，从统计学角度分析，差异无意义(P>0.05)，表明Annexin A3不是TNBC的独特的检测指标，不能作为TNBC指导治疗的独特要素。Annexin A3在TNBC与non-TNBC组织中的表达明显比癌旁组织组高，差异有统计学意义(χ2均=14.67，P均<0.05)，说明Annexin A3只能作为乳腺癌的特异指标，不能作为TNBC的独特性的指标，其有可作为一种有价值的乳腺癌的预后标记物，为以后的乳腺癌的治疗和预后提供新的方法。

[1]王新，韩丽丽，赵海丰，等.PDCD4、mTOR在乳腺癌中的表达及意义[J].黑龙江医药科学，2016，39(1)：82-86

[2]Rakha EA,EI-Sayed ME,Green AR,et al.Prognostic markers in triple negative breast cancer[J].Cancer,2007,109(1)：25-32

[3]Nielsen TO,Hsu F D,Jensen K,et al.Immunohistochemical and clinical characterization of the basal-like subtype of invasive breast carcinoma[J].Clin Cancer Res,2004,10(16):5367-5374

[4]李义强，徐默.WWO和Ang-2在乳腺癌生成与发展过程的表达[J].黑龙江医药科学，2016，39(1)：72-73

[5]Mussunoor S，Murray GI. The role of annexins in tumour development and progression [J].Pathol，2008，216 (2)：131-140

[6]Qiu HJ，Wu ZM，Wang XJ.Progress in annexins and tumor[J].Journal of Chinese Oncology，2014，20(2)：156-161

[7]邱海江，吴志明，王晓稼.Annexins 与恶性肿瘤的关系研究[J].肿瘤学杂志 ，2014，20(2)：156-161

[8]Liu YF，Xiao ZQ，Li MX，et al.Quantitative proteome analysis reveals annexin A3 as a novel biomarker in lung adenocarcinoma[J].J Pathol，2009，217( 1):54-64

[9]马静，魏素菊.三阴乳腺癌的最新治疗进展[J].中国肿瘤临床,2011,38(19):1234-1238

王新( 1963 ～ ) 男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，教授，硕士研究生导师。

卢玉元(1989～)男，甘肃酒泉人，在读硕士研究生。E-mail:278389575@qq.com。

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1008-0104(2017)04-0079-03

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