哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

李红飞，王 军，王海花，李德印，叶晓敏，米俊宪

(河南牧业经济学院 动物医学院，河南 郑州 450046)

哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

李红飞，王 军，王海花，李德印，叶晓敏，米俊宪

(河南牧业经济学院 动物医学院，河南 郑州 450046)

为制备哺乳动物促卵泡素(FSH)单克隆抗体，比对了人类、家畜、部分野生动物、鼠类等哺乳动物FSH氨基酸序列，分析其种间同源性，结果发现,多种哺乳动物FSH β亚基氨基酸序列的同源性高于80%，且线性抗原表位高度保守。从奶牛垂体组织扩增FSH β亚基CDS片段，构建pET28a-FSH重组质粒，诱导表达FSH重组蛋白，免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞孔，取效价最高孔进行克隆和亚克隆，获得1株能够分泌抗FSH的单克隆抗体细胞株，命名为B4A5。B4A5细胞株经过数次传代培养、反复冻融后生长状态良好，且能够稳定分泌抗体。采用细胞株体外培养和小鼠腹水诱生法均制备了抗FSH的单克隆抗体，其效价分别为1∶640、1∶106。分别采用Western blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的结合特异性和交叉反应性，结果显示，制备的单克隆抗体与FSH反应呈阳性，与促黄体素(LH)、促甲状腺素(TSH)、促乳素(PRL)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)均无交叉反应性。综上，获得了1株能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体可特异性结合FSH蛋白。

哺乳动物； 促卵泡素； 序列特征； 单克隆抗体

促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)是一种糖蛋白类促性腺激素[1]，由α亚基和β亚基以共价键形式连接，2个亚基均有糖基化位点，糖基以N-糖苷键方式与之连接[2]。……