反义缺氧诱导因子-1α对人膀胱癌细胞生长的影响①

战 鹏 范海涛 张 明 冯树强 郑红淑

(吉林大学第二医院泌尿外科，长春 130041)

反义缺氧诱导因子-1α对人膀胱癌细胞生长的影响①

战 鹏 范海涛 张 明 冯树强 郑红淑

(吉林大学第二医院泌尿外科，长春 130041)

膀胱癌是泌尿系统发病率和病死率均居首位的恶性实体肿瘤。近年研究发现人类绝大多数恶性实体肿瘤，其内存在低氧微环境，肿瘤细胞会激活一系列相关分子信号传导途径以适应缺氧微环境，同时增强肿瘤细胞自身的侵袭性和对放化疗的抗拒性，致使疗效降低，其中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)起到了更为关键的枢纽作用。近期有关HIF-1α作为癌基因在人体多种恶性实体肿瘤中过表达和针对其用药治疗的有效性报道较多[1,2]。但在以HIF-1α为靶点的膀胱癌研究治疗却鲜见报道。为此我们通过反义寡核苷酸技术，抑制膀胱癌细胞中HIF-1α表达，观察反义HIF-1α(AS-HIF-1α)对癌细胞生长的影响，探讨其作为癌基因用于人膀胱癌靶向分子治疗的可能性和有效性。

1 材料与方法

1.1实验材料 反义和随机对照寡核苷酸购自上海吉玛制药技术有限公司，反义HIF-1α(AS-HIF-1α)为5′-GCCTCTGTGGGTTTGCCTAGTGTTTC，随机对照序列为5′-ATTGGTAAGGATGACAGTGTA-ATTTC。在Genbank中行Blastn检测，证实ASODN与任何其他已知哺乳动物基因无匹配。DMEM和脂质体Lipofecta minc2000购自Gibco公司，Trizol试剂盒购自Invitrogen公司。人膀胱癌细胞株T24购自中国科学院上海细胞所。

1.2实验方法 ①T24细胞培养和转染：用含10%的灭活胎标准小牛血清RDMI1640培养液，在37℃，2%CO2卵育箱内贴壁培养，直到T24细胞成对数生长，细胞克隆并筛选。用Lipofectaminc2000，按照说明书所述方法分3组转染细胞。即AS-HIF-1α转染组，转染无义序列组和空白对照组。……