基于CV-1细胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测

范德玲, 吉贵祥, 杨先海, 汪 贞, 王 蕾, 刘济宁, 石利利

(环境保护部南京环境科学研究所， 江苏 南京 210042)

基于CV-1细胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测

范德玲, 吉贵祥, 杨先海, 汪 贞, 王 蕾, 刘济宁①, 石利利

(环境保护部南京环境科学研究所， 江苏 南京 210042)

以荧光素酶为报告基因，通过雌激素反应元件调控的带有荧光素酶报告基因质粒pERE-TATA-Luc和雌激素受体表达质粒rERa/pCI，采用瞬时共转染方法，将Luc报告基因质粒和受体表达质粒共转染至非洲猴肾CV-1细胞，以雌二醇作为阳性对照物，其浓度为10-10mol·L-1时显著诱导荧光素酶的表达，浓度为10-9mol·L-1时达最大值，半数效应浓度EC50值为6.1×10-11mol·L-1。通过雌二醇、己烯雌酚和木黄酮检测系统的灵敏性、有效性和稳定性验证，建立实验室稳定、灵敏的雌激素受体报告基因细胞系。基于非洲猴肾CV-1细胞受体报告基因试验，研究双酚A类似物拟雌激素干扰活性，雌激素活性大小顺序为BPAF > BPF > BPB > BPA > BPZ > BPAP > BPS > BPP。结果表明，CV-1细胞受体报告基因试验是一种筛选雌激素活性内分泌干扰物的快速、有效的方法。

双酚A类似物； 雌激素效应； 体外试验

双酚A(bisphenol A,BPA) 是一种典型的环境内分泌干扰物,被广泛应用于日用品生产中[1],在食物、水、车间空气以及人类尿液、血液、母乳中都有检出[2]。研究表明,BPA具有内分泌干扰效应等毒性效应,会对人体健康造成一定危害,包括出生缺陷、癌症和早熟等系列健康问题[3-5],BPA暴露的健康危害已经引起社会的广泛关注[6-10]。鉴于此,加拿大、法国、欧盟等国家和地区已经开始限制含BPA塑料制品的使用,尤其是对婴幼儿等敏感人群[11-12]。为了应对管制措……