改善甲状腺冷冻切片裂隙与冰晶的研究

张翠霞 方庆全 陈世东

改善甲状腺冷冻切片裂隙与冰晶的研究

张翠霞1方庆全1陈世东2

目的探讨改善甲状腺冷冻切片裂隙与冰晶的方法。方法通过实验，分别比较不同取材厚度、标本中含有液体不同处理方法、不同切片方法等条件对甲状腺冷冻切片裂隙与冰晶指标的影响。结果甲状腺冷冻切片取材厚度以0．2～0．3 cm为佳；甲状腺含有液体时以滤纸吸干为佳；甲状腺组织制成冻块后，用夹头设置为-16℃的冷冻切片机修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指温暖切面1～2 s，然后连续切片2张放弃，切取第3张切片为较佳切片方法。结论优化甲状腺组织取材厚度、标本中液体处理方法、切片方法等条件，可显著减少甲状腺冷冻切片的裂隙与冰晶现象，提高冷冻切片质量。

甲状腺；冷冻切片；裂隙；冰晶

随着医学技术的发展，冷冻切片得到了广泛应用[1-2]。冷冻切片是临床病理学的急诊工作，常用于手术科室术中快速组织学诊断，手术科室在手术进行当中取出病变组织，需要病理医师在很短时间内做出良、恶性的正确诊断，为临床医师下一步的手术方案与治疗提供指导[3]。因此，快速制作一张高质量的冷冻切片对术中病理诊断极为重要。但在制作甲状腺组织冷冻切片过程中，切片易出现组织裂隙、冰晶等情况[4]。为此，作者通过实验，探讨改善甲状腺冷冻切片裂隙与冰晶的方法。

1 资料与方法

1.1 资料

收集厦门大学附属第一医院病理科2016年7月—2017年6月的甲状腺冷冻切片标本，患者年龄21～71岁，平均年龄（38.4±12.7）岁。

1.2 设备与试剂

设备：LEICA CM1950冷冻切片机（德国莱卡）；试剂：普通胶水、AAF液（由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85：5：10的比例配制而成）。

1.3 冷冻切片的制备

（1）不同取材厚度条件下甲状腺冷冻切片的制备：收集20例术中新鲜甲状腺标本，每例切取4块组织，取材大小均为 1.5 cm×1.5 cm，取材厚度分别为：A组厚0.2 cm、B组0.3 cm、C组0.4 cm、D组0.5 cm（若组织含有液体，用滤纸吸干），将组织放置于冷冻托头中部，加适量的胶水，移至设置为-25℃的冷冻台速冻，组织制成冻块后，用夹头设置为-16℃的冷冻切片机修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指温暖切面1～2 s，然后连续切片2张放弃，切取第3张切片（厚度为 6 μm），立即放入AAF液固定20～30 s，取出切片水洗2～3 s，按常规冷冻切片染色、中性树胶封固[5]，显微镜观察。比较不同取材厚度条件下甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶2项指标的得分情况。（2）标本含有液体不同处理方法下甲状腺冷冻切片的制备：收集30例术中新鲜甲状腺标本，每例切取3块大小为1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm、质地相似、含有液体量相当的甲状腺组织，随机取其中1块组织，用滤纸吸干其液体（E组）；再随机取1块组织，用纱布吸干其液体（F组）；最后1块组织未将液体吸干（G组），3组组织余操作同 B组。比较E、F、G 组3种标本液体不同处理方法下甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶2项指标的得分情况。（3）不同切片方法下甲状腺冷冻切片的制备：收集20例术中新鲜甲状腺标本，每例切取4块组织，取材大小、含有液体处理方法、速冻方法同B组，随机取其中1块按B组的方法切片，余操作同B组（H组）；再随机取1块组织，操作基本同H组，不同的是：用戴手套的手的大拇指温暖切面5 s（I组）；再随机取1块组织，操作基本同H组，不同的是：不用戴手套的手的大拇指温暖切面1～2 s（J组）；余1块组织用冷冻切片机修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指温暖切面1～2 s，直接切取第1张切片（未连续切片2张放弃，切取第3张切片），立即放入AAF液固定20～30 s，余操作同B组（K组）。比较H、I、J、K 组4种不同切片方法下甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶2项指标的得分情况。

1.4 观察指标

无裂隙、无冰晶各10分，由2名主治以上医师进行双盲评片，每项指标数据为评分的均值。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 取材厚度对甲状腺冷冻切片的影响

由表1可见，A组与B组无裂隙、无冰晶指标得分的差异均无统计学意义（P均＞0.05）；C、D 两组无裂隙、无冰晶指标得分分别与B组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。

表1 不同取材厚度甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶指标评分结果

表1 不同取材厚度甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶指标评分结果

注：与B组比较，a：P＜0．05

2.2 标本中含有液体不同处理方法对甲状腺冷冻切片的影响

由表2可见，F组无裂隙指标得分低于E组（P＜0.05）；G组无裂隙、无冰晶指标得分均低于E组（P均＜0.05）。

表2 标本中含有液体不同处理方法甲状腺冷冻切片相关指标评分结果

表2 标本中含有液体不同处理方法甲状腺冷冻切片相关指标评分结果

注：与 E 组比较，a：P＜ 0．05

2.3 不同切片方法对甲状腺冷冻切片的影响

由表3可见，I组无冰晶指标得分低于H组（P＜0.05）；J组无裂隙、无冰晶指标得分均低于H组（P均＜0.05）；K组无冰晶指标得分低于H组（P＜0.05）。

表3 不同切片方法甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶指标评分结果

表3 不同切片方法甲状腺冷冻切片无裂隙、无冰晶指标评分结果

注：与H组比较，a：P＜0．05

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3 讨论

甲状腺癌是目前临床中较为常见的一种甲状腺恶性肿瘤疾病，治疗前准确的诊断对于提高其治疗效果有着重要的意义[6]，冷冻切片是甲状腺疾病重要的诊断方法之一。冷冻切片技术在病理诊断中具有举足轻重的作用[7-8]，甲状腺组织由于细胞丰富、血液供应丰富、常伴有囊肿，冷冻切片易出现组织裂隙、冰晶等现象。

本研究发现，甲状腺组织取材厚度为0.2～0.3 cm时，冷冻切片出现裂隙与冰晶很少，而当取材厚度0.4 cm以上时，由于组织制成冻块的时间显著延长，冷冻切片出现裂隙与冰晶的现象显著增加。

冷冻切片组织速冻前如果浸水或者自身的囊肿破裂导致组织浸水，易导致制片后镜下见多量的空隙（冰晶所致）与类似气泡样的“黑水珠”，且按压也不会消失[9]。因此取材时，应尽量避免组织接触水，如果不慎接触水后甲状腺组织自身含有液体，应立即吸干。本研究显示，用滤纸和纱布均能快速吸干甲状腺组织的液体，但使用滤纸组无裂隙指标的得分高于纱布组，更值得推荐。

甲状腺冻块修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指温暖切面1～2 s，能使组织表面硬度下降而脆性也下降，这样不但能改善或消除冷冻切片的裂隙，也能改善冰晶导致的空泡。但研究也发现，当温暖组织切面的时间≥5 s时，组织切面过软，切片的冰晶反而多于“1～2 s”组；温暖后切取第1张切片也会使冰晶增多。

综上所述，优化甲状腺组织取材厚度、标本中液体处理方法、切片方法等条件，可显著减少甲状腺冷冻切片的裂隙与冰晶现象，提高冷冻切片质量，为甲状腺组织术中病理诊断与临床手术方案的制定提供保障。

[1] 张红红． 冷冻切片与术中细胞学诊断卵巢肿瘤的对比研究[J]． 中国卫生标准管理，2016，7（11）：185-186．

[2] Sala P，Morotti M，Menada MV，et a1． Intraoperative frozen section risk assessment accurately tailors the surgical staging in patients affected by early-stage endometrial cancer：the application of 2 different risk algorithms[J]． Int J Gynecol Cancer，2014，24（6）：1021-1026．

[3] 王德田，董建强． 实用现代病理学技术[M]． 北京：中国协和医科大学出版社，2013：80．

[4] 秦岭，蔡江义． 冷冻切片结合细胞学涂片在卵巢肿瘤病理诊断中的临床价值[J]． 中国继续医学教育，2016，8（7）：39-40．

[5] 丁伟，王德田，董建强，等． 简明病理学技术[M]． 杭州：浙江科学技术出版社，2014：46．

[6] 王晓红． 探讨术中冰冻对甲状腺微小乳头状癌的病理诊断价值[J]．中国卫生标准管理，2016，7（24）：174-176．

[7] 薛晓伟，孙保存，王伟，等． 首届全国病理技术“华夏杯”冷冻切片总决赛结果分析[J]． 中华病理学杂志，2016，45（6）：413-414．

[8] 张海巍． 甲状腺微小乳头状癌的术中冰冻病理诊断分析[J]． 中国卫生标准管理，2016，7（36）：159-161．

[9] 潘黎静，戴燕燕． 甲状腺冰冻切片制作方法的探讨[J]． 山东大学学报（医学版），2014，52（5）：100-103．

Study on the Improvement of the Fracture and Ice Crystal of the Thyroid Frozen Section

ZHANG Cuixia1FANG Qingquan1CHEN Shidong21 Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen Fujian 361003, China; 2 Department of Clinical Laboratory

ObjectiveTo investigate the method of improving the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section.MethodsThrough the experiment, different thickness, different treatment methods of liquid contained in the thyroid frozen section and different slice methods were compared to explore the influence of the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section.ResultsThe thickness of the thyroid frozen section was 0.2 ～ 0.3 cm; When the thyroid tissue contains liquid, it was better to blot it up with filter paper; The thyroid tissue was made into frozen blocks,with the chuck of the freezing microtome being set to -16℃ to the required section and then warmed the tissue section with the thumb of a gloved hand 1 ～ 2 s, and then 2 serial sections were given up for third slices for better slice method.ConclusionOptimizing the thickness of the thyroid frozen section, the treatment method of liquid and the slice method can significantly reduce the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section,and improve the quality of frozen section.

thyroid; frozen section; fracture; ice crystal

R365

A

1674-9316（2017）22-0124-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．22．062

1厦门大学附属第一医院病理科，福建 厦门 361003；2检验科

陈世东