乙肝病毒大蛋白血清学诊断乙肝患者的临床意义

赵 军

（河北省唐山市丰润区人民医院， 河北 唐山 064000）

乙肝病毒大蛋白血清学诊断乙肝患者的临床意义

赵 军

（河北省唐山市丰润区人民医院， 河北 唐山 064000）

目的通过检测乙肝病毒大蛋白(LHBs)、乙肝病毒DNA以及乙肝两对半(HBV M)，探讨乙肝表面抗原大蛋白用于临床诊断乙型肝炎的意义。方法共检测357例乙肝患者血清标本，LHBs和乙肝两对半采用酶联免疫方法进行检测，采用实时荧光定量PCR方法检测HBV DNA。结果LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关性，相关系数r＝0.929；HBeAg阳性的175份标本中，HBV DNA的阳性率(97.2%)与LHBs的阳性率(94.3%)之间没有显著性差异。HBeAg阴性的182份标本中LHBs的阳性率与HBV DNA无显著性差异。结论乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA有良好的相关性，乙肝表面抗原大蛋白检测可以用于反映乙肝患者病毒DNA复制的血清学指标。

乙肝病毒大蛋白；乙肝两对半；HBV；DNA

我国慢性HBV感染患者，尤其是肝硬化患者中HBeAg阴性者高达60%以上[1]，对这些患者HBV复制程度的简单评估为临床上迫切需要解决的问题之一。临床上评估HBV复制的指标主要有HBV DNA和HBeAg，但是HBeAg阴性的乙肝患者除HBV DNA外，无其他标志物可反映HBV复制程度，与病毒蛋白标志物酶联免疫检查法相比，HBV DNA检测相对复杂，因此临床上急需一种血清免疫学指标用于反映HBeAg阴性乙肝患者HBV的复制情况。

HBV-S基因编码的表面大蛋白(LHBs)在空间上具有两种不同的跨膜构象，内侧和HBV核壳体膜结合，外侧与病毒受体结合，是HBV颗粒成熟包装的关键[2]。近些年发现Pre-S区的特有拓扑结构在乙肝病毒感染与复制等过程中起重要作用[3-4]，因此我们使用包被了针对构象型Pre-S区的高亲和力、高特异性的单抗来定量检测LHBs。本研究探讨了LHBs反映HBeAg阴性乙肝患者HBV复制程度的可靠性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有357例乙肝患者为我院2015.12—2016.12间门诊或住院乙肝患者，其中男257例，女100例。年龄16～67，平均45.5岁。乙肝诊断符合2000—2009中华传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会西安会议标准。

1.2 检测方法

乙肝两对半、LHBs采用ELISA法检测:两对半检测试剂盒为厦门英科新创科技有限公司产品，LHBs定量检测试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供。

HBV DNA检测:采用实时荧光PCR方法扩增，试剂盒为深圳匹基公司产品，使用美国伯乐ACYCLE1定量PCR仪，以拷贝数/mL表示含量，≥102拷贝/mL为阳性。

2 结果

2.1 HBeAg、HBV-LP和HBV DNA的阳性率比较

血清检测结果见表1，统计分析表明三种不同指标的阳性率差异有统计学意义，进一步分析表明HBV-LP和HBV DNA的阳性率差异无统计学意义。HBeAg阳性的175份标本中，HBV DNA的阳性率(97.2%)与 LHBs的阳性率(94.3%)之间没有显著性差异(P＞0.05)。HBeAg阴性的182份标本中LHBs的阳性率与HBV DNA无显著性差异。

2.2 乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)含量与HBV DNA相关关系

LHBs的含量与HBV DNA拷贝数呈正良好的相关性，两者的相关关系r＝0.929

表1 血清中PreS1-Ag、 HBeAg、 HBV-κLP和HBV DNA的检测结果比较

表2 HBeAg阴性和阳性慢性乙肝患者中LHBs以及HBV DNA的阳性率

表3 乙肝患者中HBV DNA与LHBs的相关关系

图1 不同HBV DNA拷贝数组别中LHBs变化趋势图

3 讨论

在HBV病毒颗粒包膜化的过程中，LHBs(即HBsAg、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白)起着关键作用，因此检测LHBs的存在对于临床上判定HBV复制具有一定的意义。L-Hbs的前S区具有复杂拓扑结构[5]，并具有反式激活病毒复制的作用，检测其存在具有重要意义。检测结果表明:LHBs能够反映HBV的复制情况，无论是在HBeAg阳性还是阴性的乙肝患者中LHBs的阳性率和HBV DNA的阳性率没有显著差异(P＞0.05)，而且血清中LHBs的含量与HBV DNA拷贝数具有较好的相关关系(r＝0.929)。由此可见，LHBs是一个较好的反映HBV复制情况的血清免疫学指标。

在HBeAg阴性乙肝患者中，HBV DNA的阳性率为59.9%，提示HBeAg阴性慢性乙肝患者中确实有很大部分患者体内仍然存在HBV的复制，LHBs的阳性率与HBV DNA阳性率没有显著差异(P＞0.05)。目前临床上HBeAg普遍作为判定患者病毒复制程度的指标，但是由于HBV病毒基因前C区或CP区发生变异，引起HBeAg合成障碍，而乙肝病毒仍然活跃复制，会出现HBeAg阴性患者中仍然呈现DNA阳性的结果，由此可见LHBs能够反映HBeAg阴性乙肝患者体内HBV复制情况，弥补目前两对半检测的不足，是HBV DNA检测的一个有益的补充。

在HBeAg阴性乙肝患者组中有8%的患者检测结果为LHBs阳性而HBV DNA阴性，我们分析有三个原因:(1)由于HBV基因变异频繁，PCR引物有一定漏检，而LHBs检测是采用单抗特异识别，基因变异的影响较少；(2)含有LHBs的亚病毒颗粒是完整病毒颗粒的10000倍，消退时间晚于HBV DNA；(3)抗病毒药物只能抑制病毒cccDNA再复制，并不能抑制已经形成的病毒表达蛋白。如果肝内cccDNA仍然较多存在，则大蛋白仍旧一段时间内存在，但是此时候血液中DNA拷贝数则可能是阴性。此外由于LHbs上的前S区具有反式激活病毒复制的能力，L-Hbs的持续存在可能预示疾病反复。

乙肝病毒大蛋白的反式激活作用有重要的临床意义，在抗病毒治疗后期，HBV DNA检测阴转或是低载量，而乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)的持续阳性很可能促进HBV复制，导致病情反复。

[1] Bruns M，Miska S，Chassot S，et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviralparticles[J].J Virol，1998，72(2):1462-1468.

[2] Bruss V，Vieluf K.Functions of the Internal Pre-S Domain of the Large Surface Protein in Hepatitis B Virus Particle Morphogenesis[J].J Virol，1995，69(11):6652-6657.

[3] Bruss V.，Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsid[J].Virus Res，2004，106(2):199-209.

[4] Carsten Lambert，Sylvia Mann et.al.Assessment of determinants fecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J].Journal of General Virology，2004，(85):1221-1225.

[5] Carsten Lambert，Sylvia Mann et.al.Assessment of determinants ffecting the dualtopology of hepadnaviral large envelope proteins[J].Journal of General Virology，2004，(85):1221-1225.

R575.1

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ISSN.2096-3718.2017.44.8528.02

本文编辑:柯 凤