黄芩素对胃溃疡大鼠胃黏膜损伤及炎症反应的影响

高 东 魏顺英 苏 岩

(青海省中医院脾胃科,青海 西宁 810000)

黄芩素对胃溃疡大鼠胃黏膜损伤及炎症反应的影响

高 东 魏顺英1苏 岩2

(青海省中医院脾胃科,青海 西宁 810000)

目的探讨黄芩素(BAI)对胃溃疡大鼠胃黏膜损伤及炎症反应的影响。方法选取成年Wistar大鼠，采用乙酸烧灼法制备胃溃疡模型，造模次日选取40只成模大鼠随机分为模型组和BAI组(n=20)，BAI组接受20 mg/kg的BAI灌胃处理，1次/d，连续2 w。同时选取20只正常Wistar大鼠作对照。实验结束后取出胃组织并检测黏膜肌层缺损宽度、溃疡面积及溃疡指数，留取血清标本用于检测血清氧化应激指标〔丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)〕、三叶因子(TFF)1和TFF2及炎症因子〔肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-2〕，比较各组大鼠胃黏膜组织中前列腺素(PG)E2和表皮生长因子(EGF)水平。结果与对照组比较，模型组的黏膜肌层缺损宽度、溃疡面积及溃疡指数均升高(Plt;0.05)，提示胃溃疡模型制备成功。与对照组比较，模型组的血清MDA、TFF1、TFF2、胃黏膜PGE2、EGF及血清TNF-α、IL-2和IL-6水平均升高，GSH-Px和SOD活性均降低(Plt;0.05)。BAI组的血清MDA、TFF1、TFF2及血清TNF-α、IL-2和IL-6水平均低于模型组；而血清TFF1、TFF2水平，胃黏膜PGE2、EGF水平及血清GSH-Px和SOD活性均高于模型组(Plt;0.05)。除IL-6外，BAI组的其余指标与对照组的差异仍有统计学意义(Plt;0.05)。结论BAI改善胃溃疡大鼠胃黏膜损伤、氧化应激及炎症反应，可能与其通过上调TFF、PGE2和EGF水平以促进胃黏膜修复有关。

黄芩素；胃溃疡；胃黏膜损伤；炎症反应

胃溃疡以胃黏膜缺血坏死并形成破溃为表现，主要病因为各种病理因素导致的胃酸和胃蛋白酶分泌增多引起的胃黏膜损伤，也有研究认为与幽门螺杆菌产生细胞毒性腐蚀胃黏膜有关〔1,2〕。氧化应激及炎症反应参与了胃黏膜的保护因素和损伤因素的失衡过程〔3〕。近年来许多研究表明中药在胃溃疡治疗上有独特功效〔4〕。黄芩素(BAI)是酚类抗氧化剂，为唇形科植物黄芩的主要活性成分之一〔5〕，研究表明BAI具有抗炎及抗氧化应激等生物学活性，还可抑制胃癌细胞增殖〔6〕。本研究拟观察胃溃疡模型大鼠接受BAI治疗后胃黏膜损伤及炎症反应情况。

1 材料与方法

1.1主要试剂 BAI(纯度98%)购自中国药品生物制品检定所，表皮生长因子(EGF)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-2检测试剂盒购自美国Ramp;D公司，三叶因子(TFF)1和TFF2检测试剂盒购自北京赛驰生物公司，丙二醛(MDA)、前列腺素(PG)E2检测试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.2动物与分组 选取雄性Wistar大鼠(体重200～250 g)，采用乙酸烧灼法制备胃溃疡模型，造模次日选取40只成模大鼠随机分为模型组和BAI组(n=20)，BAI组接受20 mg/kg的BAI灌胃处理，1次/d，连续2 w。同时选取20只正常Wistar大鼠作对照。模型组和对照组接受等体积生理盐水灌胃处理。本实验所用大鼠均购自上海斯莱克公司，于SPF级实验动物房中饲养，明暗交替12 h，室温22℃～25℃，湿度60%～70%。

1.3胃溃疡大鼠模型的建立 将大鼠禁食不禁水24 h，腹腔注射10%水合氯醛，麻醉完全后于剑突下行正中切口(长2～3 cm)，打开腹腔后轻轻拉出胃，在胃前壁胃小弯角切迹下方用1.0 ml注射器刺入浆膜下，继而注入0.1 ml 100%乙酸，待出现白点后吸净溢出乙酸，生理盐水清洗后将胃纳入腹腔，逐层缝合创口。术后当日给大鼠自由饮水，次日开始自由饮食。

1.4胃黏膜损伤情况评价 治疗2 w后处死大鼠，开腹将幽门及贲门结扎后摘取全胃，采用10%中性甲醛溶液固定后将胃剪开，采用游标卡尺测量溃疡的最大横径与纵径并计算胃溃疡面积，同时采用显微镜观察黏膜肌层缺损宽度。根据糜烂长度计算溃疡指数，其中斑点糜烂计1分；糜烂长度lt;1 mm、≥1且lt;2 mm、≥2且≤4 mm、gt;4 mm时分别计2、3、4、5分，当糜烂宽度gt;1 mm时分值×2，溃疡指数为各处糜烂的分值总和。

1.5血清生化指标检测 待实验结束后，将各组大鼠的胃幽门部和贲门部结扎后，用负压采血针抽取腹主动脉血5 ml，静置30 min后以3 000 r/min离心15 min，收集上清后置于-20℃保存待测。采用相应试剂盒采用血清氧化应激指标(MDA水平及GSH-Px和SOD活性)、三叶因子(TFF1和TFF2)及炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-2)水平，所有操作均严格按照试剂盒说明书完成。

1.6胃黏膜PGE2和EGF水平的检测 实验结束后取50 mg胃黏膜组织，经匀浆、消化后，采用Bradford法进行定量，留取上清液采用试剂盒检测胃黏膜中PGE2、EGF水平，所有操作均严格按照试剂盒说明书完成。

1.7统计学处理 采用SPSS20.0软件，计量资料两两比较采用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析。

2 结 果

2.1各组大鼠的胃溃疡情况比较 与对照组相比，模型组的黏膜肌层缺损宽度、溃疡面积及溃疡指数均升高(Plt;0.05)；BAI组的黏膜肌层缺损宽度、溃疡面积及溃疡指数均低于模型组(Plt;0.05)，但与对照组的差异仍有统计学意义(Plt;0.05)。见表1。

表1 各组大鼠的胃溃疡情况比较

与对照组比较：1)Plt;0.05；与模型组比较：2)Plt;0.05；下表同

2.2各组大鼠的血清氧化应激指标比较 与对照组相比，模型组的MDA水平升高，GSH-Px和SOD活性降低(Plt;0.05)；BAI组的MDA水平低于模型组，而GSH-Px和SOD活性高于对照组(Plt;0.05)，但BAI组以上指标与对照组的差异仍有统计学意义(Plt;0.05)。见表2。

2.3各组大鼠的胃溃疡相关因子水平比较 与对照组相比，模型组的血清TFF1、TFF2及胃黏膜PGE2、EGF水平均升高(Plt;0.05)；BAI组的血浆TFF1、TFF2及胃黏膜PGE2、EGF水平高于模型组(Plt;0.05)。见表3。

2.4各组大鼠的血清炎症指标比较 与对照组相比，模型组的血清TNF-α、IL-2及IL-6水平均升高(Plt;0.05)；BAI组的血清TNF-α、IL-2及IL-6水平低于模型组(Plt;0.05)；除IL-6外，BAI组的血清TNF-α和IL-2水平仍高于对照组(Plt;0.05)。见表4。

表2 各组大鼠的血清氧化应激指标比较

表3 各组大鼠的胃溃疡相关因子水平比较

表4 各组大鼠的血清炎症指标比较

3 讨 论

胃黏膜防御屏障功能下降及胃黏膜保护因子减少是胃溃疡发生的重要病理基础〔7〕。多种因素均参与了胃溃疡的胃黏膜损伤过程，如各种物理化学刺激、病原菌感染及机体应激状态〔8〕。胃黏膜损伤修复过程是一个多步骤多因素参与的复杂过程，涉及多种细胞、细胞外基质及细胞因子等。大量研究发现炎症反应及氧化应激是胃溃疡发生的重要基质，故有效抑制炎症反应及氧化应激对于改善胃黏膜损伤有重要意义〔9〕。BAI目前已证实具有抗炎及抗氧化应激的作用，故推测BAI用于胃黏膜的治疗有一定的可行性。本研究中模型组大鼠的黏膜肌层缺损宽度、溃疡面积及溃疡指数均升高，表明模型组大鼠出现胃溃疡损伤，给予BAI处理发现胃溃疡大鼠的以上指标均获改善，尽管与对照大鼠仍有显著差异，但证实BAI对胃溃疡大鼠的胃黏膜损伤有保护作用。本研究进一步检测表明胃溃疡大鼠发生严重的氧化应激及炎症反应；BAI处理后以上指标获改善，表明BAI在保护胃黏膜损伤过程中发挥抗氧化应激及抗炎的作用。TFF1和TFF2在胃黏膜自身防御中发挥重要作用〔10〕，其中TFF1由胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞分泌，而TFF2在胃体和胃窦部位特异性表达，两者均与细胞的增殖分化关系密切〔11〕。此外，PGE2是人体中的一种重要细胞生长因子，可增加胃黏液的分泌量及胃黏液的分泌量，继而发挥增加胃黏膜抗损伤能力〔12,13〕。EGF在维持胃黏膜完整方面发挥重要作用，不仅可调节黏膜上皮的更新过程和周期，而且可以保护胃黏膜〔14,15〕。本研究表明胃溃疡过程中机体本身可通过上调以上因子表达促进黏膜修复，但由于胃黏膜损伤程度过重，故最终仍发生严重的胃溃疡损伤。BAI处理后，TFF1、TFF2、PGE2和EGF水平获得进一步升高，进而促进胃黏膜的修复。

综上所述，BAI改善胃溃疡大鼠胃黏膜损伤、氧化应激及炎症反应，可能与其通过上调三叶因子、PGE2和EGF水平以促进胃黏膜修复有关，在胃溃疡临床治疗上有一定应用前景。

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〔2017-03-11修回〕

(编辑 徐 杰)

R5

A

1005-9202(2017)22-5523-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.016

青海省自然科学基金面上项目(81160236)

1 青海省红十字医院 2 青海省高原心脑血管病医院

高 东(1977-)，男，副主任医师，主要从事脾胃疾病研究。