参附注射液防治大鼠心搏骤停心肺复苏后心功能不全的机制

李立为 王智超 刘明蓉 朱梦莉

(武汉市第一医院急诊科，湖北 武汉 430022)

参附注射液防治大鼠心搏骤停心肺复苏后心功能不全的机制

李立为 王智超 刘明蓉 朱梦莉

(武汉市第一医院急诊科，湖北 武汉 430022)

目的探讨参附注射液在防治大鼠心搏骤停心肺复苏(CA-CRP)后心功能不全中的机制。方法体外建立大鼠CA-CPR模型，静脉给予参附注射液；心率、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)用于观察心功能变化；病理切片用于观察大鼠心脏形态学变化；酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)等心肌脂质过氧化相关指标变化。结果大鼠心功能及组织学变化显示，参附注射液可改善大鼠CPR后心功能情况。同时外周血检测发现参附注射液可明显降低MDA、XOD的表达，上调SOD的表达。结论参附注射液治疗CA-CPR的机制与清除氧自由基有关。

参附注射液；心肺复苏；心功能

临床研究表明心搏骤(CA)停-心肺复苏(CPR)后心功能不全导致循环衰竭的死亡率占总死亡的1/3以上。参附注射液是红参、黑附片的提取物，具有强心、改善微循环、扩血管等作用〔1〕。有研究报道休克患者注射参附注射液可以显著增强心缩力，降低外周阻力，增加心输出量，减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡〔2～5〕。参附注射液对CA-CPR后心功能不全的改善效果明显，不良反应少，但是具体的作用机制尚不完全清楚。本文旨在探讨参附注射液对大鼠CPR后早期心肌能量代谢及心肌损伤修复的影响。

1 材料与方法

1.1实验材料 动物：60只健康SPF级雄性Wistar大鼠，6～8周龄，体质量220～240 g，购于北京华阜康生物科技股份有限公司，合格证号为 scxk湖2009 0002。药品与试剂：总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；氯化钾，购于中国大冢制药有限公司(批号：5F96K2)；参附注射液，购于华润三九(雅安)药业有限公司(批号：15110601001)；盐酸肾上腺素注射液，购于远大医药(中国)有限公司(批号：151216)。

1.2方法

1.2.1大鼠CA-CPR模型的制备 窒息合并冰氯化钾停跳液致大鼠CA-CPR模型的制备及心搏骤停标准参考谢伟峰等〔6〕研究方法。

1.2.2分组与给药 60只SPF级Wistar大鼠随机分为3组，每组20只。假手术组：直接手术猝死。生理盐水组：手术猝死后行CPR(剂量等同参附注射液同体积)。参附注射液组：手术猝死后行CRP，同时给予参附注射液尾静脉滴注，剂量20 ml/kg，滴注速度20 ml/h。

1.2.3取材方法 术后8 h，尾静脉抽取大鼠静脉血500 μl，置于含乙二胺四乙酸(EDTA)的抗凝管中。

1.3指标检测 (1)心功能指标：动物多导联生理记录仪记录心率、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)；(2)形态学检测：两组动物均于复苏后1 h再次麻醉后处死，迅速解剖游离心脏。普通病理取材:苏木素-伊红(HE)染色，4%多聚甲醛、常温固定标本；(3)脂质过氧化相关指标检测：酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中MDA、SOD、黄嘌呤氧化酶(XOD)。

1.4ELISA实验 用包被缓冲液将已知抗原(MDA、SOD、XOD)稀释至10 μg/ml，4℃过夜。次日加血清0.1 ml于上述反应孔中，37℃孵育1 h，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1 ml，37℃孵育30 min，加入四甲基联苯胺(TMB)底物溶液0.1 ml，37℃ 10 min，加入2 mol/L硫酸0.05 ml，在ELISA检测仪上，于450 nm处，测OD值以判断。同时按以上方法测蛋白标准品OD值，并绘制蛋白浓度标准曲线；前列环素(PG)L2、内皮素(ET)-1、血管紧张素Ⅱ、血管性血友病因子(vWF)浓度以测量OD值在标准曲线上换算。

1.5统计学方法 应用SPSS17.0软件进行方差分析。

2 结 果

2.1参附注射液对大鼠心功能的影响 假手术组均无心率、中心静脉压，平均动脉压(15±7)mmHg。相比于生理盐水组〔心率(456±23)次/min，平均动脉压(136±18)mmHg，中心静脉压3 cmH2O〕，注射参附注射液后，CPR后大鼠心率〔(339±12)min/次〕、平均动脉压〔(167±8)mmHg〕、中心静脉压(6 cmH2O)显著改善(Plt;0.05)。见表1。

2.2参附注射液对大鼠心肌脂质过氧化相关指标的影响 参附注射液可明显降低MDA、XOD的表达，但相反上调SOD的表达(Plt;0.05)。见表1。

2.3参附注射液对大鼠心脏形态学的影响 生理盐水组大鼠心肺复苏后，可见心肌大量破坏，心肌间质中充填大量炎性细胞；而在注射参附注射液后，大鼠心肌组织逐渐恢复正常轮廓、炎细胞逐渐减少。见图1。

表1 三组大鼠外周血心肌脂质过氧化相关指标表达的比较

图1 参附注射液对大鼠心脏形态学的影响(×400)

3 讨 论

缺血再灌注损伤是造成心脏骤停后心功能不全的主要因素，CPR后，心肌细胞可产生大量氧自由基。CPR进而损伤心肌细胞〔6〕，这是CPR后患者死亡的主要原因〔1〕。XOD是一种黄素酶，主要催化核苷酸的分解代谢及超氧阴离子的生成〔7〕。缺氧条件下，心脏能量代谢急剧降低，黄嘌呤脱氢酶(XDH)在白细胞释放的蛋白酶作用下大量不可逆地转变成XOD〔5〕。MDA 是反映氧自由基产生及引起脂质过氧化反应的标志性指标〔8〕，可促进心肌细胞内蛋白质与核酸脂质发生交联，进而引起心肌细胞基因突变〔9〕。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，可通过歧化反应清除体内有害的氧自由基，从而保护细胞。本实验结果表明，参附注射结果与辛毅等〔5〕研究结果一致。表明参附注射液在防治大鼠CA-CPR后心功能不全发挥积极作用，以期为临床应用参附注射液提高CPR成功率提供有效方法和实验依据。

1中国康复研究中心.心肺复苏新进展〔C〕.北京：第六届北京国际康复论坛——内科康复分论坛论文集,2011:8.

2李春盛,刘沐芸.参附注射液对低血容量休克血流动力学及氧输送的影响〔C〕.北京：第三届世界中西医结合大会论文摘要集,2007:2.

3陈 榕,夏中元,孟庆涛,等.参附注射液对体外循环心内直视术中心肌损伤的保护的Meta分析〔J〕.中国医药导报,2014;11(8):96-103.

4李章平，陈寿权，章 杰，等.不同剂量参附注射液对窒息型大鼠心肺复苏后心肌保护作用的研究〔J〕.中国中西医结合急救杂志，2007;14 (3):162-6.

5辛 毅,吴永涛,顾 云,等.参附注射液对缺血/再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究〔J〕.心肺血管病杂志,2010;29(3):229-32.

6Matsushima S,Tsutsui H,Sadoshima J.Physiological and pathological functions of NADPH oxidases during myocardial ischemia-reperfusion〔J〕.Trends Cardiovasc Med,2014;24(5):202-5.

7Higashi Y,Maruhashi T,Noma K,etal.Oxidative stress and endothelial dysfunction:clinical evidence and therapeutic implications〔J〕.Trends Cardiovasc Med,2014;24(4):165-9.

8欧 好,杨明施,孙 蓓,等.肾上腺素联合血管加压素在窒息家兔心肺复苏中的应用〔J〕.医学临床研究,2006;23(7):1032-5.

9雷丰丰,岳淑琴,孙礼刚,等.红芪总多糖对衰老大鼠体内自由基清除及抗氧化能力的调节作用〔J〕.山东医药,2015；55(1):11-3.

〔2017-04-15修回〕

(编辑 袁左鸣)

R54

A

1005-9202(2017)22-5558-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.031

武汉市卫计委资助课题(No.WX16E26)

王智超(1968-)，男，主任医师，主要从事急诊研究。

李立为(1979-)，男，硕士，主治医师，主要从事急诊研究。