布鲁氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表达特点分析

汪露，刘芳，李辉

（新疆医科大学第二附属医院检验科，新疆 乌鲁木齐 830063）

临床研究

布鲁氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表达特点分析

汪露，刘芳，李辉＊

（新疆医科大学第二附属医院检验科，新疆 乌鲁木齐 830063）

目的观察布鲁氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表达特点。方法选取我院2015年6月-2017年3月期间收治的53例布鲁氏菌病患者（研究组）和同期来我院接受健康体检的50例健康体检者（对照组）作为研究对象，采集两组对象血液标本，检测PD-1、PD-L1表达水平。再根据病程的不同将研究组患者分为急性期组和慢性期组，对比两个亚组患者的PD-1、PD-L1表达水平。结果研究组的PD-1、PD-L1表达水平分别为（25.09±4.82）%、（48.52±6.69）%，高于对照组的（10.98±5.01）%、（20.17±3.50）%（P＜0.05）。急性期组的PD-1、PD-L1表达水平分别为（33.72±5.13）%、（54.43±6.80）%，高于慢性期组的（17.60±4.88）%、（42.39±6.38）%（P＜0.05）。结论布鲁氏菌病的发生可导致血清PD-1和PD-L1明显升高，且PD-1和PD-L1的表达水平会随着病程变化而变化。

布鲁氏菌病；PD-1；PD-L1；病程；表达特点

布鲁氏菌病为布鲁氏菌入侵生物体后所引起的一种细菌传染病，人畜均可患病，具有临床症状变化多样、病程长、并发症多等特点，发生后可对患者身体健康和畜牧业发展造成寄到危害[1]。近年来，越来越多的研究[2,3]证实，布鲁氏菌病的发生与患者机体细胞免疫功能下降存在明显相关性。PD-1为免疫球蛋白超家族的一员，与PD-L1结合后能够发挥免疫抑制作用，两者表达变化能够在一定程度上反映细胞免疫功能[4]。基于上述研究现状，本研究对布鲁氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表达特点进行分析，现将研究内容进行以下汇报。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2015年6月-2017年3月期间收治的53例布鲁氏菌病患者和通气来我院接受健康体检的50例健康体检者，并分别设为研究组和对照组。研究组中，男性28例，女性25例，年龄21岁-70岁，平均年龄（43.94±4.32）岁，急性期患者24例，慢性期患者29例。对照组中，男性26例，女性24例，年龄19岁-75岁，平均年龄（43.86±4.27）岁。两组研究对象的一般资料间差异无统计学意义（P＞0.05），本研究已获取伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法 PD-1、PD-L1检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。采集两组研究对象空腹外周血10 mL，应用密度梯度法分离单个核细胞，使用PBS（磷酸缓冲盐溶液）调节细胞密度，形成细胞混悬液，使细胞密度为每毫升1×107个，应用CD3+和CD4+标记PD-1、PD-L1。在每个反应管中加入100 μL细胞混悬液进行避光孵育，使用PBS洗涤两次后将上清液去除，加入300 μL 1%多聚甲醛进行固定，使用流式细胞仪对CD3+和CD4+进行计数，测定PD-1、PD-L1阳性细胞占CD3+和CD4+细胞的比例即为PD-1、PD-L1的表达水平。

1.3 观察指标 对比两组研究对象血清PD-1、PD-L1的表达水平以及研究组中急性期组和慢性期组两个亚组患者的血清PD-1、PD-L1表达水平。

1.4 统计学分析 应用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，采用t检验。计数资料采用率（%）表示，采用卡方检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组、对照组血清PD-1、PD-L1表达水平比较 研究组患者血清PD-1、PD-L1表达水平均较对照组健康体检者高（P＜0.05），见表1。

2.2 研究组中两个亚组患者的血清PD-1、PD-L1表达水平比较 研究组中急性期组患者的血清PD-1、PD-L1表达水平均较慢性期组患者高（P＜0.05），见表2。

3 讨论

布鲁氏菌病的主要传染源为动物，传播途径较广，包括呼吸道、消化道等，流行病学调查结果显示，伴随着畜牧业的快速发展，我国布鲁氏菌病患者的发病率不断上升，造成了多方面的负面影响。近年来，我国开展了较多关于布鲁氏菌病的病理学机制研究，旨在为该疾病的早期诊断和治疗提供参考依据，但在研究方向上很少涉及细胞免疫学。

PD-1为程序性细胞死亡因子，同时也是一种跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族，PD-L1为PD-1的配体。研究证实两者在调节细胞免疫功能中发挥着重要作用。本研究对布鲁氏菌病患者血清PD-1、PD-L1的表达特点进行分析，旨在通过该研究方向了解布鲁氏菌病的免疫病理变化。研究发现免疫细胞表达的PD-L1、PD-1在结合后能够使细胞内的ITIM和ITSM发生酪氨酸残基磷酸化，发挥抑制免疫细胞增殖的作用，当机体免疫功能下降时，两者在血清中的表达水平明显上升。

表1 研究组、对照组血清PD-1、PD-L1表达水平比较（Mean±SD）

表2 研究组中两个亚组患者的血清PD-1、PD-L1表达水平比较（Mean±SD）

本研究结果显示布鲁氏菌病患者的血清PD-1、PD-L1表达水平明显高于健康体检者，布鲁氏菌病急性期患者的血清PD-1、PD-L1表达水平明显高于处于疾病慢性期的患者。对上述研究结果进行分析和总结，本研究得出布鲁氏菌病的发生可对细胞免疫功能产生影响，导致血清PD-1、PD-L1表达水平明显升高，同时也提示我国临床可根据血清PD-1、PD-L1表达水平辅助诊断布鲁氏菌病和评估布鲁氏菌病患者的治疗效果。

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新疆医科大学科研创新基金项目（No.XYDCX201539）