HPLC法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸含量

魏立华，陈芸生

（1.南平市第二医院，福建 南平354200；2.南平市食品药品检验检测中心，福建 南平354200）

HPLC法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸含量

魏立华1，陈芸生2

（1.南平市第二医院，福建 南平354200；2.南平市食品药品检验检测中心，福建 南平354200）

目的 建立高效液相色谱法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸含量。 方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6×250 mm，5 μm）分析柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，检测波长为242 nm，流速为1.0 mL／min，进样量10 μL，柱温为35℃。 结果 茯苓酸在5.05～30.75 μg／mL浓度范围呈现良好的线性关系（r＝0.9999），平均加样回收率为98.2%，RSD为1.45%。 结论 本方法简便、快速、准确，重复性好，可用于茯珍儿科胶囊的质量控制。

茯珍儿科胶囊；茯苓酸；高效液相色谱法

茯珍儿科类制剂在儿科中应用较为广泛，在临床上用于治疗儿童痰湿惊厥、呕吐腹泻以及肠痛纳呆等多种病症，功能清邪退热、定惊除痰。茯珍儿科胶囊是多种中药提取相应成分进行加工制成，主要含茯苓、竹黄、牛黄等6种中药成分，其中茯苓是君药，而茯苓中的重要有效成分是茯苓酸［2］。茯珍儿科胶囊中茯苓酸的含量对于该药物功效有着重要的影响，因此，制药过程中确保茯苓酸的含量是关键环节。为了定量控制茯珍儿科胶囊中茯苓酸的含量，进而确定方中茯苓的质量，以保证茯珍儿科胶囊治疗效果的发挥，本实验选用高效液相色谱法测定茯珍儿科胶囊中茯苓酸的含量。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪E2695（美国 Waters公司）；茯珍儿科胶囊（福建省南平市第二医院提供）；茯苓酸对照品（批号：20110501，含量 99.1%，成都瑞芬思生物科技有限公司）。主要试剂包括甲醇、乙腈、二次蒸馏水、磷酸。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18柱色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；选用乙晴－0.1%磷酸溶液作为流动相；以242 nm为茯苓酸的检测波长；色谱柱温度保持在35℃；保持流速1.0 mL／min；每次进样量均为10 μL。

2.2 对照品溶液制备 精密称量茯苓酸对照品，以甲醇为溶剂配制15 μg／mL茯苓酸溶液，作为茯苓酸对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 精密称量茯珍儿科胶囊约3 g，在100 mL试剂瓶中以50 mL甲醇为溶剂溶解；称定重量，超声处理45 min放冷；再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀过滤；取续滤液25 mL于分液漏斗中，加入2%氯化钠溶液25 mL，采用环己烷对样品进行提取；共提取3次，每次30 mL，合并环己烷液，蒸干；残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，备用。

2.4 线性关系考察 精密吸取上述制备的茯苓酸对照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；分别精密吸取上述5份溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积；以进样浓度、峰面积分别为横、纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：

茯苓酸 Y＝10512X＋1650.5，r＝0．999 9

结果表明：茯苓酸在 5.05～30.75 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，上述色谱条件下，分别在溶液制备后的0、2、4、6、8 h进样测定，以峰面积计算RSD为0.94%。测定结果表明：供试品溶液制备后8 h内稳定。

表1 稳定性实验考察

2.6 精密度试验 精密吸取茯苓酸对照品溶液（C＝11.1 μg·mL-1）10 μL，在上述色谱条件下，连续重复测定6次，以峰面积计算RSD为0.53%，表明本实验精密度良好。

2.7 重复性试验考察 分别精密称取同批号茯珍儿科胶囊6份，按照供试品溶液的制备方法测定并计算茯苓酸的含量，结果见表3，提示该测定方法重复性较好。

表2 精密度试验

表3 重复性试验

2.8 回收率试验 分别精密称取同批号茯珍儿科胶囊 2 g（其中茯苓酸含量约为 0.058 9 mg／g），9 份，精密加入茯苓酸对照品溶液0.5、1.0、1.5 mL，平行操作3份，按含量测定法测得峰面积，并计算含量，计算回收率。见表4。

表4 回收率试验

2.9 样品含量测定 取3批茯珍儿科胶囊（批号为 170 521、170 603、170 625），分别按照供试品溶液的制备方法测定并计算茯苓酸的含量，含量分别为0.086 5、0.090 2、0.088 3 mg·g-1，RSD 为 1.36%。

3 讨 论

茯珍儿科胶囊作为儿科用药，其中茯苓为君药，发挥诸多功效。既往研究提示茯苓中主要的化学成分有两种，即多糖类成分和三萜类成分［4-5］。既往在茯苓相关成分含量测定上，主要是研究其三萜类成分，或其单一成分测定或其多个成分测定，如茯苓酸、去氢土莫酸等，其中以茯苓酸的含量测定相关报道最多［6］。本研究选择检测获珍儿科胶囊中的茯苓酸属于三萜类中的主要有效成分，具有显著的抗炎、调节免疫功能、利尿、抗肿瘤的药理作用，其含量的测定对于保障茯珍儿科胶囊的药物功效有着重要的意义。

当前测定中药三萜类成分的方法主要有光谱学、生物学以及色谱学等，尤以高效液相色谱法为最常用的方法，故本研究建立高效液相色谱法测定茯珍儿科胶囊中的茯苓酸含量。首先根据茯苓酸的最大紫外吸收确定检测波长为242 nm；再考察甲醇和乙醇两种溶剂的提取效率，结合茯苓有效成分含量测定的既往文献，确定以甲醇为提取溶剂；同步考核超声30、45、60 min提取情况，结果表明超声45 min提取已完全。其次流动相的选择：流动相是影响高效液相色谱（HPLC）性能的重要因素，最初选择甲醇、乙晴、磷酸等进行实验选择最合适的流动相。先采用甲醇-乙晴-磷酸、乙晴-水以及乙晴-0.2%磷酸作为流动相进行实验，发现其基线不稳定，导致茯苓酸色谱峰值不明显，容易导致测定的峰面积存在较大误差；后根据流动相溶剂的极性，将乙晴与磷酸溶液调整一定的混合溶剂比例，最终选用乙晴-0.1%磷酸溶液为流动相，具有较平稳的基线，可明显分离出茯苓酸的吸收峰与杂质峰，在色谱上呈现明显波峰。此外，该流动相的保留时间与测定分析时间相匹配。

［1］ 赵英博，徐斌，昝俊峰，等.不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究［J］.中国中医药信息杂志，2009，16（7）：41-42.

［2］ 沈玉萍，李军，贾晓斌．中药茯苓化学成分的研究进展［J］．南京中医药大学学报，2012，28（3）：297-300．

［3］ 于世林.高效液相色谱方法及应用［M］.2版.北京：化学工业出版社，2005.

［4］ 程水明，桂元，沈思，等．茯苓皮三萜类物质抗氧化活性研究［J］．食品科学，2011，32（9）：27-30．

［5］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［6］ 杨鹏飞.桂枝茯苓胶囊及其单味药获苓化学成分和生物活性研究［D］.北京：北京协和医学院，2012：3215-3218.

R284.1

A

1000-338X（2017）06-0035-02

2017-10-09

魏立华（1971—），女，主管中药师，主要从事医院临床药剂工作。