TSC1在胃癌组织中的表达及其意义*

李 慧 宫为大

(1.皖南医学院机能学实验中心,安徽 芜湖 241001; 2.芜湖市第一人民医院康复科,安徽 芜湖 241000)

TSC1在胃癌组织中的表达及其意义*

李 慧1宫为大2

(1.皖南医学院机能学实验中心,安徽 芜湖 241001; 2.芜湖市第一人民医院康复科,安徽 芜湖 241000)

目的 研究抑癌基因TSC1蛋白在胃癌组织及正常胃组织中的表达水平。方法 选取芜湖市第一人民医院于2014年7月—2016年12月收治的50例胃癌患者作为研究对象，应用Western-Blot法检测所有患者胃癌组织及癌旁正常胃组织中TSC1蛋白及β-actin蛋白的含量，通过比较两种组织中TSC1带与β-actin带的黑度值比值(A)来了解TSC1蛋白的表达情况。结果 胃癌组织中A值较正常胃组织中A值低，且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 抑癌基因TSC1基因表达产物在胃癌组织中的表达水平较正常胃组织低，有可能在胃癌的早期诊断及预防方面发挥作用。

抑癌基因；TSC1蛋白；胃癌；Western-Blot

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，居我国消化道恶性肿瘤的第二位，男性的发病率高于女性。早期诊断、早期治疗是保证患者预后良好的重要措施。目前肿瘤标志物如CEA、CA125等被认为可以作为判断胃癌预后及治疗效果的依据，尚不能作为诊断胃癌的指标。而结节性硬化综合症(TSC)的致病基因包括TSC1及TSC2均被认为是重要的抑癌基因，这两种基因所编码的蛋白可以通过互相结合从而抑制细胞的异常增殖[1-2]。因此，本实验研究TSC1基因表达产物，即TSC1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取芜湖市第一人民医院于2014年7月—2016年12月收治的50例胃癌患者作为研究对象，保留患者手术标本，并分别取胃癌组织及癌旁正常胃组织。患者中男性33例，女性17例；年龄为35～64岁，平均年龄为(56.31±4.86)岁；其中腺癌(肠型和弥漫型)38例，乳头状腺癌2例，管状腺癌3例，鳞状细胞癌3例，腺鳞癌2例，未分化癌1例，小细胞癌1例。所有患者均经病理学检查确诊为胃癌，并排除患有其他种类恶性肿瘤的患者及有严重器质性病变的患者。

1.2检测方法 依次进行以下步骤：制备蛋白样品，SDS-PAGE电泳(制胶、上样、电泳)，转膜，免疫反应，显色(结果检测)，分析图像。通过图像分析系统的扫描，来测定相应的黑度值。并且根据图像中条带的深浅及大小来观察TSC1基因表达产物的含量。分别选择上海信裕生物科技有限公司生产的Hamartin/TSC1 Antibody、碧云天公司生产的辣根过氧化物酶标记的IgG单抗作为一抗和二抗的试剂。

1.3观察指标 由于β-actin蛋白的表达水平在不同组织中的表达差异性比较小，可以分别测定胃癌组织及正常胃组织中TSC1带与β-actin带的黑度的比值(A)，用A值来反应不同组织中TSC1蛋白的表达水平。A值越高，代表该蛋白的表达水平越高。

2 结 果

正常胃组织中TSC1带与β-actin带的黑度值比值(A)为0.17±0.11，明显高于胃癌组织中的黑度值比值(0.11±0.10)，差异具有统计学意义(t=3.32，P<0.05)。

3 讨 论

研究[3-4]表明TSC1和TSC2基因均为重要的抑癌基因，其中TSC1基因由23个外显子构成，可以编码TSC1蛋白，也就是错构瘤蛋白,而TSC2基因则可以通过转录和翻译而编码马铃薯球蛋白，这两种蛋白可以通过互相结合而构成复合体，参与细胞增殖等过程。当TSC基因发生突变或者损伤时，mTOR信号通路则会被激活，细胞的增殖分化受到影响，从而促使肿瘤的发生。

胃癌的发病率和病死率在世界范围内都处于前列，尤其是在我国的西北和沿海地区。目前对于胃癌的发病机制尚不清楚，认为其可能与幽门螺杆菌(HP)的感染、饮食因素、地理环境、慢性疾患和癌前病变有关。分子生物学方面的研究[5]表明，胃癌的发生是一个多阶段、多因素的发展进程，其中可以涉及到各种基因，如c-met、K-ras等癌基因的过表达，Rb、P53等抑癌基因的基因突变等。目前，已经有TSC1基因与胰腺癌等恶性肿瘤间关系的研究，而TSC1基因与胃癌的研究尚不多见，因此本研究检测胃癌组织中TSC1蛋白的表达，结果发现TSC1蛋白在胃癌组织中的表达水平低于正常胃组织，且差异具有统计学意义(P<0.05)，提示TSC1基因可能在胃癌的发生过程中发挥了作用。我们认为，这可能与TSC1蛋白可以在细胞从G0期—G1期的进展过程中发挥其调控作用，控制细胞的增殖有关，因此当该蛋白的表达水平降低时，会加快细胞从静止期进入分裂期的过程，而引起大量细胞的增殖[6]。同时，TSC1蛋白在胰岛素-PI3K-Akt-mTOR-S6K信号传导通路中可以发挥重要的作用，进而调节细胞的生长分化及记忆能力。而上述信号传导通路可以在肿瘤细胞的分化、生存及血管生成等方面发挥作用。这些都说明了TSC1蛋白可以通过影响细胞的分化进而影响胃癌的发生发展。

综上所述，TSC1基因表达产物，即TSC1蛋白在胃癌组织中的表达水平低于正常胃组织。该蛋白的检测有可能在胃癌的早期诊断及预防方面发挥作用，但其在胃癌中的具体作用机制还有待更进一步的研究。

[1] 王玉国,林颖,罗春玉，等.应用Ion Torrent半导体测序技术检测结节性硬化症患者的致病突变[J].中华医学遗传学杂志,2016,33(2):169-172.

[2] 孙丹,刘智胜,胡家胜，等.结节性硬化症患儿TSC1/TSC2突变基因型与表型的相关性分析[J].中华实用儿科临床杂志,2015,30(6):461-466.

[3] 黄昌艳.结节性硬化症TSC1/TSC2基因突变的高通量测序快速诊断[J].细胞与分子免疫学杂志,2016,32(1):92-95.

[4] 李花,胡湘蜀,费凌霞，等.结节性硬化症患者基因突变与临床表型的关系[J].中华神经科杂志,2016,49(5):369-374.

[5] 左婷婷,郑荣寿,曾红梅，等.中国胃癌流行病学现状[J].中国肿瘤临床,2017,44(1):52-58.

[6] Niida Y,Wakisaka A,Tsuji T，et al.Mutational analysis of TSC1 and TSC2 in Japanese patients with tuberous sclerosis complex revealed higher incidence of TSC1 patients than previously reported[J].Journal of Human Genetics,2013,58(4):216-225.

皖南医学院中青年科研项目(WK201414)。

李慧(1983—)，安徽芜湖人，研究生，实验师，研究方向：分子生物学。

R735.2

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1004-7115(2018)01-0059-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.019

2017-10-17)