高危型HPV基因型在门诊就诊人群中的分布特征

严鸣光 殷卫兵

人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是女性通过性传播感染的最常见病毒［1］。至今已发现的HPV亚型有100多种，分为低危型HPV（low⁃risk HPV，LR⁃HPV），如 6、11型，和高危型HPV（high⁃risk HPV，HR⁃HPV），如16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型等。各亚型与体内特定部位感染和病变有关，其中HR⁃HPV持续感染与女性宫颈癌的发生、发展密切相关［2⁃3］。研究证实，在99.7%的宫颈癌患者中发现HPV⁃DNA的存在，其中16、18、45、31亚型最多见［4⁃6］。所以在女性中检测HPV对于宫颈癌的早期筛查具有重要价值，也可以为本地区的HPV疫苗的研发提供重要的参考资料。因此，本研究对来我院妇科门诊就诊患者的HPV感染情况及基因亚型分布进行了流行病学回顾性分析。

1 资料与方法

1.1 样本采集与保存

收集2014年1月至2017年1月在我院妇科门诊就诊的5 086例HPV可疑感染者的HPV检测样本，患者年龄 14～78岁，平均年龄（40.5±10.1）岁。由妇科门诊医生采集宫颈脱落细胞，将其放入加有专用细胞保存液的取样管中。样本采集后放置于4～8℃保存，24 h内测定。

1.2 试剂和仪器

凯普生物科技有限公司提供：21种HPV分型检测试剂盒（包含HPV⁃DNA抽提试剂、PCR扩增试剂和杂交试剂）、医用核酸分子快速杂交仪；PCR扩增仪型号为Roche LightCycler480（罗氏公司）。新柏氏ThinPrep2000全自动细胞制片机（Cytyc，美国）、奥林巴斯显微镜（Olympus，日本）。

1.3 检测方法

1.3.1 HPV基因分型检测

按HPV⁃DNA抽提试剂说明书操作提取DNA：将采集的样本振荡混匀，取500 μL，14 000 r/min离心1 min，弃上清。PCR扩增：将提取的DNA作为模板进行扩增，每份PCR反应体系为25 μL。PCR产物杂交和显色按杂交试剂说明进行。

1.3.2 病理检查

样本类型为宫颈脱落细胞，按全自动细胞制片机的仪器操作说明制片，用95%乙醇固定，巴氏染色，显微镜下观察。……