PRR11在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌生长转移的调控机制分析

赵婷婷

【摘要】乳腺癌被认为是世界上比较严重的恶性肿瘤，对女性健康造成了严重的威胁。借助多种特征性肿瘤转移模型、乳腺癌细胞模型乳腺癌生长转移阶段PRR11的作用，能够更好的反映出乳腺癌细胞生长转移的调控机制，本文将会对PRR11在乳腺癌细胞中的表达及意义、PRR11对乳腺癌细胞增殖和凋亡所产生的影响、PRR11对乳腺癌迁移和侵袭所产生的影响、PRR11对乳腺癌细胞生长转移的调控机制等进行探究，以期为乳腺癌的诊断和治疗提高参考和借鉴。

【关键词】PRR11;乳腺癌;细胞生长转移;调控机制

乳腺癌是临床上的常见病和多发病，对于早期患者通过手术的方法给予切除，但是对于晚期患者则需要给予内分泌治疗或化学药物治疗。通过对乳腺癌的分子病理分型进行分析和研究，不仅可以为其诊断和治疗提供参考和借鉴，而且还可以提高患者的预后效果。近些年来，富含脯氨酸的蛋白（PRRII）是新发现的一类基因，其分布在染色体17q22上，主要包括了9个内含子和10个外显子，并且mRNA具有多个转录本，能够编码360个氨基酸（约40kD），开放读码框长度达到了1083bp。临床研究发现，PRR11在胃癌、胆管癌、肺癌、胰腺癌等疾病中具有非常高的表达，而且参与了肿瘤细胞的转移和增殖等行为，被公认为促癌基因，因此对PRR11在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生长转移的调控机制进行分析尤为重要。

1 PRR11在乳腺癌细胞中的表达及意义

借助实时荧光定量PCR、免疫荧光和免疫印迹来对乳腺癌细胞SK-BR3、MCF-7、MDA-MB-231以及正常乳腺上皮细胞MCF-10A中PRR11的表达情况进行检测。同时选择免疫印迹、实时荧光定量PCR和免疫组织化学法来对正常组织与乳腺癌组织中PRR11的表达差异进行检测，进一步明确乳腺癌组织中PRR11的表达与增殖指数、分子分型、肿瘤分期、组织分级等临床病理特征之间的联系。此外，还可以通过Cox风险比例回归模型和生存分析来对PRRII对乳腺癌细胞患者预后的影响进行预测和分析。

通常情况下，免疫荧光检测结果显示PRR11主要在乳腺癌细胞浆内表达，而且免疫印迹和实时荧光定量PCR检测结果显示，在乳腺癌细胞系中PRR11的蛋白质和mRNA的表达要超过正常乳腺组织和细胞。免疫组化检测结果显示，PRR11高表达的乳腺癌组织所存在的增殖标志物Ki67的表达要超过PRR11低表达的乳腺癌细胞，并且随着乳腺癌分期的提高PRR11的表达增加。实际上，PRRII的表达与肿瘤大小、病理分期、远处转移、孕激素受体状态等保持着非常密切的联系，但是其与淋巴结状态和年龄无明显联系。生存分析结果显示与PRR11低表达患者相比，高表达患者生存期明显缩短，该指标可以作为乳腺癌患者预后效果的预测指标。

2 PRR11对乳腺癌细胞增殖和凋亡所产生的影响

要想更好的了解和掌握PRR11表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡所产生的影响，则需要构建空载体对照（RNAi-Vector）和慢病毒介导的下调体系（RNAi-PRRll），然后借助免疫印迹就可以准確的检测出下调效果，从而得到PRR11稳定下调的MCF-7和MDA-MB-231细胞，同时还开展了EdU、MTT、TUNEL（凋亡检测）和平板克隆实验，结果发现PRRIl-shRNA能够对乳腺癌细胞的PRR11蛋白表达水平进行下调，而且MTT实验结果发现，PRR11表达下调后，乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞活力出现了不同程度的降低，并且在MTT实验第72小时，MCF-7和MDA-MB-231细胞的活力基本上下降到了51.0%和40.1%。EdU实验结果发现，PRR11表达下调后，MCF-7和MDA-MB-231细胞的EdU阳性细胞所占百分比分别从最好是的21.0±1.5%和28.2±2.2%降至11.5±2.1%和15.5±1.1%，从而反映出细胞DNA合成速率不同程度上受到了抑制。通过进行平板克隆实验发现，PRR11表达下调前MCF-7和MDA-MB-231细胞的克隆形成数是110±11.5和148. 7±14.5，而PRR11表达下调后MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆形成数下降到了40.0±5.6和70±11.6，进而反映出PRR11表达下调能够对乳腺癌细胞的克隆形成能力起到一定的抑制作用。在含1%血清培养液中，对乳腺癌细胞孵育24h后，借助TUNEL实验来对PRR11下调后可能对乳腺癌细胞凋亡的影响进行检测，结果发现PRR11表达下调前MCF-7和MDA-MB-231细胞的凋亡率分别是1.0±0.2%和1.4±0.2%，而PRR11表达下调后MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡率分别是12.1±0.9%和13.3土0.8%，因此可以判定PRR11表达下调后能够有效降低乳腺癌细胞的抗乏血清饥饿能力，进一步加快了细胞的凋亡。

3 PRR11对乳腺癌迁移和侵袭所产生的影响

3.1 PRR11表达上调能够加快乳腺癌细胞的迁移和侵袭

要想更好的了解和掌握PRRII上调对乳腺癌迁移和侵袭所产生的影响，可以选择乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞进行细胞划痕和Transwell侵袭实验，其中细胞划痕实验结果发现PRRI1表达上调后可以使MCF-7和MDA-MB-231细胞相对迁移距离达到了0.68±0.09和0.87士0.04，而PRR11表达正常时的MCF-7和MDA-MB-231细胞相对迁移距离为0.46±0.04和0.58±0.06。Transwell侵袭实验结果发现，PRRII表达上调之前每个视野内平均MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭数为106±9和146±15，PRR11表达上调后每个视野内平均MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭数升高至175±13和315±17，从而可以反映PRRII表达上调能够加快乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

3.2 PRR11表达下调能够阻碍乳腺癌细胞迁移和侵袭

同样借助细胞划痕和Transwell侵袭实验来检测PRR11表达下调对乳腺癌迁移和侵袭所产生的影响，细胞划痕结果发现转染了Contro-RNAi的MCF-7和MDA-MB-231细胞的相对迁移距离为0.45±0.05和0.58±0.04，而转染了RNAi-PRRll后MCF-7和MDA-MB-231细胞的相对迁移距离下降至0.2±0.02和0.32±0.04。Transwell侵袭实验结果发现，PRR11表达上调之前每个视野内平均MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭数为104±8和13 7±14，PRR11表达上调后每个视野内平均MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭数下降至36±4和48±7，从而可以反映IPRRI1表达下调能够进一步阻碍乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

3.3 PRR11表达上调能够加快乳腺癌MCF-7细胞出现上皮间质转化

通常情况下，在肿瘤细胞转移能力方面，上皮间质转化（EMT）是比较常用的标志，为了研究PRR11是否能够促进乳腺癌细胞产生EMT，需要开展一系列的实验进行验证。如果上调PRR11表达后，将会导致MCF-7细胞的形态出现明显的变化，而且使细胞从上皮样逐渐向间质样进行转化。通过免疫印迹实验结果发现，PRR11过表达后，可以降低MCF-7细胞中上皮细胞标志物E-cadherin，并且提高间质细胞标志物Vimentm和Fibronectin表达，从而可以说明PRR11表达上调能够加快乳腺癌MCF-7细胞出现上皮间质转化。

4 PRR11对乳腺癌细胞生长转移的调控机制

4.1 对PRR11潜在调控的重要信号转导通路进行筛选

通常情况下，PI3-K/Akt通路、Ras通路、Notch通路及Wnt/β-catenin通路被认为是调控细胞生长转移的主要通路，此时可以选择乳腺癌MCF-7细胞，并通过对PRR11上调前后对PI3 -K/Akt通路、Ras通路、Notch通路及Wnt/β-catenin通路所产生的影响进行分析，通过开展PI3-K激酶活性实验，可以得知PRR11表达增加与PI3 -K激酶活性之间不存在必然的联系，并且Ras活性实验同样显示PRR11对Ras通路不会产生调控作用，但是Realtime PCR实验结果发现，如果PRR11表达上调后，将会导致乳腺癌MCF-7细胞中p-catenin表达升高，但是Notchl、Notch2、DLIA等分子并未出现比较明显的变化，此时就可以分析PRRI1是否可以通过对Wnt/p-catenin通路进行调控来实现对乳腺癌细胞增殖和转移产生影响。

4.2 PRR11通过B-catenin信号通路可以完成对乳腺癌细胞增殖和转移的调控

本次研究过程中选择了乳腺癌MCF-7细胞，并分析了在PRRI1调控乳腺癌增殖转移阶段，β-catenin信号通路所起到的作用，通过进行免疫印迹实验可以发现，如果PRR11表达上调后，将会导致乳腺癌MCF-7细胞中核内表达量和β-catenin信号总表达量出现升高现象，并且调控的下游基因c-myc、cyclinDl、Vimentin和E-cadherin表达同样也会出现升高现象。反之，如果PRR11表达下调后，将会导致上述指标也随之下降。该研究结果可以反映PRRI1升高可能促进p-catenin表达，并逐渐其向核内转位，这样一来就可以推动下游基因的转录。为此可以借助双荧光素酶报告基因实验来对其进行验证，结果发现，如果PRR11上调后，将会激活p-catenin转录，并提高质粒荧光强度（TOPIFOP），反之如果PRR11表达下调，将会减弱荧光强度，从而反映出PRR11的确可以促进β-catenin转录因子的活性。

4.3 阻断β-caterun信号通路能够抑制PRR11对细胞增殖和迁移

为了更好的了解和掌握PRR11可以借助β-catenin信号通路来实现对乳腺癌生长与转移的调控作用，可以对乳腺癌MCF-7中PRR11表达给予上调，并通过siRNA下调了β-catenin的表达，随后就可以开展细胞功能实验和相关分子检测。通过蛋白印迹检测后发现，β-catenin表达下调后，如果对PRR11表达进行上调将会导致c-myc、cyclinDl、Vimentm表达增加被抵消，但是E-cadherin表达将会逐渐恢复。通过双荧光素酶报告基因实验发现，β-catenin表达下调，同时PRR11上调将会导致质粒荧光强度升高被抵消。这些实验结果都可以说明PRR11可以有效的作用于p-catenin信号通路，并通过β-catenin信号通路来实现对乳腺癌细胞生长和转移的有效调控。

5 结束语

综上所述，乳腺癌对人类的身体健康和生命安全造成了较大的威胁，而诱病因素比较多，而且确保患者的病情得到有效的诊断和治疗，则需要分析和探究PRR11在乳腺癌中的表达及其對乳腺癌细胞生长转移的调控机制，以便对乳腺癌病情有个全方位的了解和掌握，进而提高其治疗效果。

参考文献

[1]白明辉，刘海潮.PRR11蛋白在肝细胞癌组织中的表达及意义[J].广东医学，2017，4 （16）：57-58.

[2]陶家寿，李云峰，罗骁.PRR11蛋白在人胰腺癌中的表达及其意义[J].中国癌症杂志，2015，12 （03）：117 -118.

[3]郑振东.PRR11在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌生长转移的调控机制研究[D].2016，第二军医大学：肿瘤学，