微波提取法提取北五味子木脂素条件研究

孟华 董智睿

【摘要】目的：通过单因素实验法，探讨微波法提取北五味子中木脂素的工艺条件。方法：根据木脂素的溶解性、微波功率、溶剂/基质比率、萃取时间这些因素，利用高效液相色谱进行分析，确定最佳提取工艺条件。结果：通过单因素实验法的验证，确定了最佳的提取条件。结论：以经过验证的最佳提取工艺条件，用微波提取法提取北五味子木脂素，提取得到的木脂素含量最高。

【关键词】五味子;木脂素;微波提取法;单因素实验

我国五味子属药用植物资源丰富又是著名的滋补性中药。因其果实甘、酸、辛、苦、成五味俱全，故名五味子[l]。五味子分北五味子和南五味子，北五味子质比南五味子优良。北五味子呈不规则的球形或扁球形，直径5～8mm。表面红色、紫红色或暗红色，皱缩，显油润，果肉柔软，有的表面呈黑红色或出现“白霜”。

《本草经疏》中提到;五味子主益气者，肺主诸气，酸能收，正入肺补肺，故益气也。其主咳逆上气者，气虚则上壅而不归元，酸以收之，摄气归元，则咳逆上气自除矣。劳伤赢瘦，补不足，强阴，益男子精。《别录》养五脏，除热，生阴中肌者，五味子专补肾，兼补五脏，肾藏精，精盛则阴强，收摄则真气归元，而丹田暖，腐熟水谷，蒸糟粕而化精微，则精自生，精生则阴长，故主如上诸疾也。

五味子中的主要有效成分是木脂素，其总含量的比例为2%～8%，木脂素结构中大多具有联苯环辛二烯母核，是一类低极性小分子的化合物。近年来，国内外学者[2，3]已经从五味子科植物中分离鉴定出近200种木脂素成分，其中具有明显生物活性的有：五味子甲素schisandrinA、五味子乙素schisandrinB、五味子丙素schi sandrm C等。

五味子甲素、乙素、丙素、醇乙、酯乙可明显延长小鼠对戊巴比妥钠或环己巴比妥钠的睡眠时间，乙素及酯乙对小鼠的睡眠时间有先延长后缩短的双相性影响[4]。

微波辅助提取又称微波萃取，是利用微波的热效应对样品及其有机溶剂进行加热，从而将目标组分从样品肌体中分离出来的一种新型高效分离技术。与传统的萃取技术相比，微波萃取技术具有许多独特的优点，被誉为“绿色萃取技术”，并已成为实现中药现代化的重要关键技术之一[5]。以单一因素法探索提取五味子中木脂素的合适溶剂，微波功率、萃取时间、萃取温度、溶剂/基质比率，初步确定最佳工艺条件，用高效液相色谱进行含量测定[6]。

1 实验方法

1.1 木脂素的分析

1.1.1 标准曲线绘制

对照品溶液制备：精密称取标准品，用甲醇一水（83： 17）溶液配成lOml溶液。按色谱条件：岛津shim-PackC18柱，（250mmx4.6mm，lOμm）;流动相：甲醇一水（65： 35）;柱温：40℃;流速：1.0ml/min：检测波长230 nm进样旦.5.OμL。测定峰面积积分值，以浓度（ μg/ml）为横坐标，峰面积积分值（mv）为纵坐标，绘制标准曲线[7]。

Y甲素=17479X+120012，R2=0.9991;

Y乙素=10116X+63690，R2=0.9999;

Y酯甲=16415X-2766.4，R2=0.9986。

1.1.2 供试品溶液的测定

供试品溶液制备：移取5.0g五味子提取物，加入适量甲醇溶液，配制成10 ml的溶液，再取部分上述溶液，进行薄膜过滤，即得到木脂素粗溶液。按上述色谱条件，测定供试液中木脂素的峰面积积分值，以回归法计算得含量，从而确定提取木脂素的最佳提取工艺条件。

2 单因素实验

2.1 反应影响因素的探索

2.1.1 溶剂的选择

精确称取5份5克北五味子粉末样品置烧瓶中，按溶剂/基质比率为12：1分别加入氯仿、丙酮、正己烷、苯、乙醇溶液，设定微波功率600W，微波萃取时间8min。然后过滤，将滤液于旋转蒸发仪上浓缩，干燥成膏状称重。用高效液相色谱分析溶剂对提取效率的影响。

2.1.2 微波功率的选择

精确称取3份5克北五味子粉末样品置烧瓶中，按溶剂/基质比率为12：1加入氯仿溶液，微波萃取8min。然后过滤，将滤液于旋转蒸发仪上浓缩，干燥成膏状称重。用高效液相色谱分析微波功率对提取效率的影响。

2.1.3 溶剂/基质比率

精确称取5份5克北五味子粉末样品置烧瓶中，设置微波功率600W，萃取时间8min，温度58℃，分别用溶剂/基质比率10：1、12：1、14：1、16：1、20：1的氯仿溶剂。然后过滤，将滤液于旋转蒸发仪上浓缩，干燥成膏状称重。用高效液相色谱分析溶剂/基质比率对提取效率的影响。

2.1.4 萃取时间

精确称取5份5克北五味子粉末样品置烧瓶中，按溶剂/基质比率为12：1的配比加入氯仿溶液，分别用微波萃取5min、8min、lOmin、12min、15min。 然后过滤，将滤液于旋转蒸发仪上浓缩，干燥成膏状称重。用高效液相色谱分析萃取时间对提取效率的影响。

2.2 木脂素的含量测定

2.2.1 溶液的制备

精密称取标准品，用甲醇一水（83：17）溶液配成10ml溶液，摇匀，过滤，备用。

精密称取供试品，用甲醇一水（83：17）溶液配成10ml溶液，摇匀，过滤，备用。

2.2.2 检验条件

色谱柱： 岛津shim-Pack C18柱（250mmx4.6mm，10μm）;流动相：甲醇.水（65： 35）;柱温：40℃;流速：1.0ml/min;检测波长：254nm;进样量：5.0μL。

3 结论

经单因素探索实验优化确定了的最佳工艺条件为：微波功率600W，溶剂/基质比率为12：1，萃取时间为8min，实验温度58℃。经验证，在该条件下的产品产量确为所有进行的实验中的最高产量。

参考文献

[1]王振中.五味子的药理研究进展[J].时珍国药研究，1996，7 （02）：119-121.

[2]可成友，高珍等.北五味子植物化学成分及其活性的研究进展[J].辽宁农业科学，2007 （03）： 57-60.

[3] Bischof MG， BernroiderE， Krssak M，et al. Hepaticglycogen Metabolism in type1 diabetes after long-term near normoglycemia [J].Diabetes， 2002， 51： 49-54.

[4]霍艳双，陈晓辉，李康等.北五味子的镇静、催眠作用[J].沈阳药科大学学报，2005，22 （02）：126-128.

[5]沈岚，冯年平，韩朝阳等.微波萃取对不同形态结构中药及含不同極性成分中药的选择性研究[J].中草药，2002， 33 （07）： 604-607.

[6]高春花，钟海雁等.五味子木脂素提取分离纯化和含量测定的研究进展[J].食品与机械，2007，23 （01）：151-155.

[7]王洋，牛遇达等.北五味子中五味子甲素及乙素含量的高效液相色谱分析[J].林产化学与工，2007，27 （01）：85-88.