补肾解毒法对多发性硬化小鼠CD4+ T细胞的作用

周哲屹，刘宝珠，裴珊珊，谢 炜 ，汪鸿浩

(1．柳州市中医院脑病科，广西 柳州 545002；2. 广州中医药大学，广东 广州 545002；3.南方医科大学南方医院中医内科，广东 广州 510515；4.南方医科大学南方医院神经内科，广东 广州 510515)

多发性硬化(multiple sclerosis, MS)是一种常见的神经系统疾病，以中枢神经系统白质脱髓鞘为主要病理特征[1]。MS一般可累及脑室周围的白质、小脑、脑干和脊髓等，常反复发作，合并多神经功能缺损，症状可逐渐加重。其发病机制尚不明确，目前认为与自身免疫密切相关。CD4+T细胞的分化在MS的发病机制中占有核心地位。近期研究提示，CD4+Th1/CD4+Th2细胞轴、CD4+Th17/CD4+Treg细胞轴功能失调对MS的发生、发展具有重要意义[2-4]。临床研究认为，中医药治疗MS具有一定的优势，可以改善临床症状，有效缓解复发[5]。临床观察及前期研究认为，补肾解毒法对多发性硬化具有良好效果[6]，可能与其调节免疫功能有关，但其机制尚不明确。本研究利用MS的经典模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)模型，采用免疫组织化学和流式细胞仪检测炎性指标及Th1、Th2、Th17、Treg细胞等CD4+T细胞亚群，探讨补肾解毒法对中枢神经炎症及外周血Th1/Th2细胞轴、Th17/Treg细胞轴的影响，从而探讨补肾解毒法改善MS临床症状的可能机制。

1 材料

1.1 实验动物 SPF级C57BL/6雌性小鼠由南方医科大学实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK(粤)2011-0015,共48只，6～8周龄，体质量18～20 g，分笼饲养于南方医科大学实验动物中心，室内温度20～25 ℃，标准饲料及饮水，标准光照和黑暗节律12 h/12 h。

1.2 药物 补肾解毒汤(熟地黄24 g,山茱萸、山药各12 g,泽泻、牡丹皮、茯苓、黄连各9 g)按常规方法煎煮，委托南方医科大学附属南方医院制剂室进行加工，收集滤液并用文火煎煮浓缩制成2 g/mL的水提物，对pH值、比重、卫生学指标等进行检测，冷藏，用前加温、摇匀。……